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莱菔硫烷对原代培养神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用及机制研究

吴雪梅  
【摘要】:目的:探讨莱菔硫烷(SFN)对氧糖剥夺(OGD)/复氧(R)损伤的皮质神经元凋亡的影响并探讨其与PI3K/AKT通路的关系。 方法: (1)新生1d的SD乳大鼠,皮质神经元原代培养5-6d后,细胞被随机分为正常对照组、OGD组、SFN组,SFN+LY组及LY组,建立皮质神经元的OGD模型。 (2)1h后复氧,模拟再灌注模型,OGD/R期间给予0.1、0.2、0.5、1、2.5、5μmol/LSFN,PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)在OGD/R期间与SFN或不与SFN同时加入神经元。 (3)复氧24h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定神经元的存活率,Hoechst33258/PI联合染色法测定细胞损伤程度,免疫荧光和Western blot观察神经元OGD/R后Bcl-2、cleaved caspase-3、Akt和p-Akt的表达。 结果: (1) MTT结果显示在SFN处理浓度在1μmol/L时,可显著增加神国家自然科学基金资助(No.30900457和No.81070917)经元的细胞存活率。 (2) Hoechst33258/PI联合染色结果显示SFN可显著减少神经元的损伤。 (3)免疫荧光和Western blot结果显示SFN增加Bcl-2和p-Akt的表达,减少cleaved caspase-3的表达。而LY294002抑制p-Akt的表达,减少Bcl-2的表达,增加cleaved caspase-3的表达。 结论: SFN可减轻OGD/R引起的皮质神经元的凋亡损伤,这可能与激活PI3K/AKT抗凋亡通路有关。


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