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沉默胃癌高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)对肿瘤血管生成的初步研究

李釩  
【摘要】:目的:初步探讨胃癌BGC-823细胞中GMⅡ对胃癌血管形成的影响及其可能机制。 方法:1.检测胃癌组织和正常胃粘膜组织中GMⅡ的表达和CD34标记的微血管密度(MVD),分析GMⅡ的表达和MVD之间的关系。 2.采用脂质体介导法将GMⅡ基因的真核表达质粒转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。 3.将胃癌BGC-823细胞与HUVEC共培养,利用RT-PCR、Westernblot,检测GMⅡ沉默后的抑制效应以及BGC-823细胞中VEGF-A和HUVEC中VEGFR-2的表达情况。 4.采取Transwell体外迁移实验方法检测GMⅡ沉默后对共培养的HUVEC增殖,迁移的情况的影响。 结果:1.1GMⅡ蛋白分别在正常胃粘膜组织中的阳性表达率为43%(17/40);在高分化胃癌组中的阳性表达率为60%(6/10);在中分化胃癌组中的阳性表达率为59%(13/22),在低分化胃癌组织中为96%(24/25),低分化组中GMⅡ蛋白的阳性表达率明显高于正常胃粘膜组织,差异有统计学意义(P 0.05)。 1.2低分化胃癌组中MVD为(30.56±6.57)个/HP,高于正常胃粘膜组织中(23.32±7.24)个/HP,差别具有统计学意义(P 0.05)。 2.用RT-PCR、Western blot,检测发现GMⅡ、VEGF-A和VEGFR2的mRNA和蛋白表达明显减弱,差别具有统计学意义(P均0.05)。 3.HUVEC增殖活性检测:GMⅡ沉默组共培养的HUVEC与空白对照和空载对照组的细胞相比,增殖能力明显受抑制,差别具有统计学意义(P0.05)。 4. HUVEC迁移能力检测:GMⅡ沉默组共培养的HUVEC与空白对照和空载对照组的细胞相比,其迁移能力明显降低,24h穿过Transwell小室的细胞数分别为:(65±5)、(167±4)、(154±4),差别具有统计学意义(P0.05)。 结论:沉默BGC-823细胞的GMⅡ基因后,可使肿瘤细胞中的VEGF-A和HUVEC上的VEGFR-2表达降低,HUVEC的增殖活性,迁移能力减弱,进而导致肿瘤血管生成减少,这可能与GMⅡ基因抑制后胃癌组织中血管生成受到影响有关。


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