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PCR-DGGE对新生儿坏死性小肠结肠炎肠道菌落结构其动态性研究

郑树芳  
【摘要】:目的 新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC, neonatal necrotizingenterocolitis)是新生儿特别是早产儿的急腹症,临床以腹胀、呕吐、便血、严重休克为表现,X线以肠壁囊样积气为特征。本病在国内的病死率高,尤其是早产儿,严重影响新生儿健康。NEC是多因素的疾病,细菌感染是其中一个不可缺少的致病因素。有研究表明,NEC未被发现在无菌的动物模型上,说明了无菌无NEC。有假说表明新生儿肠道异常细菌的定植是NEC发生的一个重要因素。但目前国内外对NEC肠道细菌感染的细菌成分和动态性变化并无清晰的了解。本实验采用PCR结合DGGE来观察NEC肠道微生态成分和动态变化,为NEC疾病的发病机制和临床防治提供细菌学理论基础。 材料与方法 从重庆市儿童医院新生儿病房2009年8月份-2009年12月份共收治32例,其中NEC组和对照组各16例。NEC组根据实用儿科学诊断标准收取,每例均有x片(+)及大便隐血(+)。根据国际Walsh andKliegman的BELL对于NEC疾病的分期标准,均为Ⅰ期(轻度)。对照组根据基础疾病以及临床特征:性别,胎龄,生产方式,喂养方式,出生体重,抗生素使用时间来尽量匹配。取其新鲜大便,提肠道细菌总DNA,用16s rDNA V3可变区引物进行聚合酶链反应(PCR,polymerase chain reaction)扩增,然后变性梯度凝胶电泳(DGGE,denaturing gradient gel electrophoresis),割胶回收细菌DNA测序,进行肠道细菌多样性分析包括丰富度(richness,S)和Shannon index(H′)指数,序列比对分析。 结果 变形梯度凝胶电泳结果显示:13/16(即81.25%)的NEC组跟对照组比较,肠道细菌菌落的Shannon指数相对较高(NEC组vs对照组,p0.05),分布不均,波动明显,细菌的多样性高于对照组,细菌菌落多样性特征存在一定的差异。NEC组的Shannon指数在发病初期明显增多,随着疾病的治疗与恢复,呈先降后升的趋势。DGGE胶回收测序显示新生儿肠道优势菌群以肺炎克雷伯杆菌属,大肠埃希氏菌属,肠球菌属为主,NEC组与对照组种类没有明显区别,存在数量上的差异。3/16(18.75%)趋势不明显,shannon index差异不大。 结论 实验表明,NEC患儿的肠道菌群失衡可能是NEC发病的肠道细菌感染的重要因素。


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