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肺炎克雷伯菌的血清分型及毒力基因分布的研究

和晋渝  
【摘要】:研究目的:肺炎克雷伯菌为革兰氏阴性杆菌,广泛分布于自然界,亦存在于健康人与动物的呼吸道和肠道中。当机体免疫力下降或长期使用抗生素导致菌群失调时可引起感染。感染类型主要包括:肺炎、脑膜炎、肝脓肿、眼内炎、泌尿系统发炎、伤口感染、败血症等。近年来,肺炎克雷伯菌已成为仅次于大肠杆菌的第二大条件致病菌,是引起社区获得性感染与医院院内感染不可忽视的潜在病原体。肺炎克雷伯菌毒力因子主要包括:荚膜多糖(K抗原)、Ⅰ型菌毛、脂多糖(O抗原)、铁摄入能力等。荚膜多糖是肺炎克雷伯菌的主要毒 力因子。根据荚膜多糖(K抗原)分型,可将肺炎克雷伯菌分为82个K血清型。其中K1、K2和K5血清型与人和动物体的严重感染性疾病有密切关系。K1型菌株通常导致弗里德兰德杆菌性肺炎,尤为突出的是化脓性肝脓肿并发症。K2和K5血清型通常导致社区获得性肺炎。鼻硬结病则与K3血清型相关。临床分离自萎缩性鼻炎的肺炎克雷伯鼻炎亚种大多来自K4血清型和极少数K5血清型。K54和K57型菌株与群体侵入性肝脓肿综合征发病相关。相比其他血清型,K1、K2、K54和K57型为强毒力菌株,常见于肺炎病例中。尤其以K1和K2型毒力最强,近年来流行趋势日趋严重,已成为临床细菌性肝脓肿综合征的主要致病菌。 目前国内有关肺炎克雷伯菌的分离及鉴定、耐药情况、产ESBLs的情况以及相关危险因素、流行病学方面研究报道较多,而缺乏荚膜血清型和毒力基因方面的相关研究。因此我们对肺炎克雷伯菌临床分离株进行K血清型和毒力基因的检测,欲了解我国重庆、北京、深圳三地肺炎克雷伯菌株的血清型分布及流行趋势,分析其毒力基因的分布特点和缺失情况,根据其分离菌株可能携带的毒力基因对其可能导致的疾病做出推测,从而为我国的肺炎克雷伯菌株分型、溯源、合理治疗奠定理论基础。 研究对象与方法:在本研究中,我们对来自我国重庆、北京、深圳三地的310株肺炎克雷伯菌株临床分离株,通过提取菌株基因组DNA。采用聚合酶链反应技术,选用PCR的靶基因包括肺炎克雷伯菌体外溶血酵素基因khe及其毒力相关基因。PCR的反应体系为30μL体系,反应条件为:95℃预变性3min;94℃变性40S,退火温度48-58℃退火40S,72℃延伸1min,共30个循环。最终对其进行K血清型检测和毒力基因的筛查。 研究结果:经PCR检测后发现,310株菌中,K1、K2、K54、K57、K3、K5和K20型分别占14.2%、9.4%、6.5%、4.2%、2.5%、2.3%和1.9%。来自呼吸系统标本的分离株中K1血清型菌株在4种检测的强毒血清型中占首位,为呼吸系统总数的17.4%。11种毒力基因都出现不同程度的缺失现象,无论是来自总体还是分别来自重庆、北京、深圳三地,其菌株中的ureA、wabG和fimH毒力因子检出率均较高,相对的,iroNB毒力因子检出率均为最低。各个血清型菌株中,ureA和wabG检出率最高,均为阳性结果。除K5血清型外,iroNB检出率均为最低。研究结论:结果显示310株肺炎克雷伯菌在已鉴别的4种强毒性 血清型中K1血清型菌株所占比例高,较为流行。与已鉴定的以上7种血清型相比,其他血清型所占比例较大,如需进一步了解其他未鉴定的血清型菌株在国内的分布,则需对临床分离株进行其他血清型分型,以期明确是其他血清型的肺炎克雷伯菌在我国的分布和流行趋势。310株肺炎克雷伯菌中11种毒力基因都出现不同程度的缺失现象,推测其毒力因子的分布可能与血清型有一定的关系。本研究揭示了我国重庆、北京、深圳三地肺炎克雷伯菌株的血清型分布及流行趋势,毒力基因的分布特点和缺失情况,从而为其分型、溯源、合理治疗奠定理论基础,为该菌的感染防治开创新的前景。


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