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人血浆中尿酸及嘌呤物质的含量测定

彭建春  
【摘要】:尿酸是体内嘌呤和核酸物质的最终代谢产物,正常情况下血中尿酸浓度为20-60mg/L,当尿酸浓度过高时,常常引起痛风、肾结石、高血压和冠心病等,因此监测体内尿酸的浓度是非常必要。目前临床上测定尿酸的含量多采用尿酸酶法,但由于血浆中黄嘌呤、抗坏血酸和自由基的影响,使尿酸浓度测定结果误差较大,本文建立了高效液相色谱法和液相色谱/同位素稀释质谱法同时测定人血浆中尿酸和嘌呤物质的含量。 第一部分反相高效液相色谱法同时测定人血浆六种嘌呤物质的含量 目的:建立同时测定血浆中6种嘌呤物质的高效液相色谱法,比较正常人与白血病和肝硬化患者血浆中6种嘌呤的含量差异,考察它们与白血病(Leukemia)和肝硬化(liver cirrhosis)疾病的关系。 方法:色谱柱:Phenomenex C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:50mmol/L醋酸铵(pH4.65)-甲醇(99:1,v/v);流速:1mL/min;检测波长:254nm;柱温:30℃;进样量:100μL。 结果:尿酸、次黄嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤、别嘌呤醇、腺嘌呤相邻峰之间的分离度分别为:5.39、1.64、3.56、5.45、5.39。尿酸在0.5-20μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9997;次黄嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤和别嘌呤醇在0.005-0.3μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r分别为0.9998、0.9993、0.9999和0.9993;鸟嘌呤在0.015-0.3μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9971。 结论:白血病和肝硬化患者血浆中的尿酸、次黄嘌呤和黄嘌呤含量明显高于正常人,腺嘌呤和鸟嘌呤无明显差异。 第二部分高效液相/同位素稀释质谱法测定血浆中的尿酸及嘌呤物质 目的:建立液相色谱/同位素稀释质谱法同时测定人血浆中尿酸、黄嘌呤和别嘌呤醇含量的方法。 方法:以[1,3-15N2]尿酸和[1,3-15N2]黄嘌呤为内标,乙腈为血浆蛋白沉淀剂,用电喷雾离子源的三重四极杆质谱仪,选择离子监测(SIM)模式检测目标离子(负离子模式,[1,3-15N2]尿酸:M/Z169;尿酸M/Z:167;[1,3-15N2]黄嘌呤:153;黄嘌呤M/Z:151;别嘌呤醇M/Z:135),用峰高内标法定量。 结果:尿酸在25-1028μmol/L浓度范围内线性关系良好,相关系数r=0.9989;黄嘌呤和别嘌呤醇在10-400μmol/L浓度范围内线性关系良好,相关系数r分别为0.9985、0.9951。用建立的两种方法对5个相同样品进行测定,测定结果基本一致。 结论:高效液相色谱法可准确测定血浆中的尿酸及嘌呤物质的含量。


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