痛风性关节炎中血管粘附因子1信号转导通路及其相关作用机制的研究

【摘要】：目的：探讨尿酸钠（MSU）晶体诱导人滑膜细胞产生血管细胞粘附分子1（VCAM-1）及其可能的信号通路及其相关作用机制。 方法：（1）通过人膝关节滑膜组织取材，培养人关节滑膜细胞后，分别用不同剂量的MSU晶体（700，1000，1400uM）刺激人滑膜细胞，用免疫组化检测滑膜细胞内VCAM-1的表达，并在不同时间点（0，4，8，12，24，48小时），通过Western blot检测VCAM-1的表达情况，确立尿酸盐浓度—VCAM-1表达水平的时间量效关系。 （2）首先通过Western blot检测滑膜细胞经过MSU处理后，丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPAR-γ)信号分子的激活情况。然后用MAPKs的拮抗剂（PD98059，SB203580，SP60012）处理滑膜细胞，抑制其相应信号通路后，再次通过Westernblot方法检测滑膜细胞经MSU晶体刺激后，VCAM-1的表达情况。 （3）将50ul MSU注入大鼠踝关节腔内，建立大鼠痛风性关节炎模型。在不同时间点（1，4，6，24，48小时）观察大鼠踝关节功能情况及肿胀情况，用免疫组化方法检测大鼠踝关节经MSU晶体刺激后，VCAM-1的表达情况。取大鼠踝关节行HE染色，扫描电镜观察关节软骨破坏情况。 结果：（1）同空白对照组相比，不同剂量（700，1000，1400uM）的MSU晶体均能刺激人滑膜细胞表达VCAM-1（p0.05）；1000uM组和1400uM组，同700uM组相比较，其VCAM-1的相对值峰值有明显差异（p＜0.05）。1000uM组和1400uM组间VCAM-1的表达相对值峰值无明显差异（p＞0.05）；MSU可以以剂量和时间依赖性的方式增加人滑膜细胞中VCAM-1的表达。 （2）在经过尿酸盐处理后，滑膜细胞ERK,P38，JNK的磷酸化水平明显升高，PPAR-γ的表达水平降低（p＜0.05）；在经过MAPK的拮抗剂（PD98059，SB203580，SP60012）处理后，VCAM-1表达明显降低（p＜0.05）。 （3）经过尿酸盐处理的大鼠踝关节，在不同的时间观察点均出现明显的关节肿胀和功能障碍（p＜0.05），同对照组相比较，实验组大鼠关节滑膜VCAM-1的表达明显升高，关节软骨破坏明显。 结论：（1）MSU能刺激关节滑膜细胞表达VCAM-1，不同浓度的MSU在一定范围内均可呈剂量依赖性地诱导VCAM-1的表达,并且在24小时达到峰值。（2）蛋白激酶（MAPKs）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)信号通路参与了VCAM-1的表达。蛋白激酶（MAPKs）在其中主要起上调的作用，而过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPAR-γ)起下调的作用。（3）在大鼠痛风性关节炎模型体内，尿酸盐可以大鼠的关节肿胀和功能障碍，并且可以诱导VCAM-1的表达，引起关节软骨的破坏。