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血小板源性生长因子-B(PDGF-B)信号通路在胃癌转移中的作用机制的实验研究

郭轶  
【摘要】:第一部分PDGF-B和PDGFR-β在胃癌组织的表达及其临床意义 目的:探讨血小板源性生长因子B(PDGF-B)和血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。 方法:采用免疫组化SP法检测32例胃癌手术标本中胃癌组织及其对应的正常胃粘膜组织中PDGF-B和PDGFR-β的表达情况,并与胃癌患者临床资料进行相关性分析。 结果:胃癌组织中PDGF-B主要表达于肿瘤细胞,阳性率70.3%(45/64),PDGFR-β主要表达于肿瘤间质细胞,阳性率60.9%(39/64);均明显高于正常的胃粘膜组织中的PDGF-B阳性率4.7%(3/64)和PDGFR-β的阳性率3.1%(2/64)(P0.05)。PDGF-B和PDGFR-β的表达与肿瘤浸润深度,淋巴结转移及肿瘤分期呈正相关(P0.05);与肿瘤分化程度没有相关性(P0.05)。 结论:PDGF-B和PDGFR-β在胃癌组织中高表达并与胃癌的进展及转移关系密切;检测PDGF-B和PDGFR-β的表达可以作为判断胃癌转移和预后的指标之一。 第二部分:PDGF-B慢病毒载体的构建、包装和PDGF-B过表达胃癌细胞株的构建 目的:构建PDGF-B的慢病毒载体pLeno-DCE-PDGF-B并转染成功构建PDGF-B稳定过表达的胃癌细胞。 方法:构建PDGF-B慢病毒载体pLeno-DCE-PDGF-B,感染293T细胞,收集上清液测定病毒滴度。用慢病毒转染SGC7901和BGC823胃癌细胞株,用免疫荧光观察和western-blot方法鉴定PDGF-B稳定过表达胃癌细胞构建结果。 结果:通过PCR及酶切鉴定成功构建pLeno-DCE-PDGF-B载体,包装并得到高滴度的病毒颗粒。用慢病毒转染后SGC7901和BGC823胃癌细胞免疫荧光观察呈绿色荧光,转染后SGC7901和BGC823胃癌细胞中PDGF-B蛋白表达明显高于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05)。 结论:用慢病毒构建方法可成功构建并包装得到高滴度的PDGF-B慢病毒颗粒;采用PDGF-B慢病毒转染可成功构建PDGF-B稳定过表达的胃癌细胞。 第三部分PDGF-B过表达对胃癌细胞生长,侵袭能力的影响及其机制 目的:探讨PDGF-B过表达对胃癌细胞株生长和侵袭能力的影响及其机制。 方法:慢病毒载体转染构建PDGF-B稳定过表达胃癌细胞株。用MTT法和Transwell侵袭实验分别检测PDGF-B稳定过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞及常规SGC7901和BGC823胃癌细胞的生长和侵袭能力,并进行相互比较分析。采用Western-blot法检测PDGF-B过表达前后AKT-1和E-cadherin蛋白在SGC7901和BGC823胃癌细胞中的表达情况。 结果:PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞的生长曲线明显高于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05)。PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞的侵袭数量分别为65.4±2.4和70.2±3.2,明显多于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞的21.6±1.6和30.2±2.2(P0.05)。PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞中AKT-1蛋白表达明显高于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05),E-cadherin蛋白在PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞和常规SGC7901和BGC823胃癌细胞中的表达没有明显差异(P0.05)。 结论:PDGF-B过表达可以明显增强胃癌细胞的生长和侵袭能力,可能与胃癌进展和转移相关。其机制可能与PDGF-B自分泌作用激活PI3K/AKT通路相关。 第四部分PDGF-B信号通路与上皮间质化和胃癌转移的相关性及其机制 目的:探讨PDGF-B信号通路与上皮间质化和胃癌转移的相关性及其作用机制。 方法:采用Western-blot方法检测PDGF-B过表达前后SGC7901和BGC823胃癌细胞中AKT-1、ERK-1、E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达情况,并进行比较分析。采用细胞共培养技术模拟激活PDGF-B信号通路,用Western-blot和RT-PCR方法检测共培养情况下常规SGC7901和BGC823胃癌细胞,共培养情况下PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞中AKT-1、ERK-1、E-cadherin和N-cadherin蛋白及mRNA表达情况,并进行比较分析。 结果:PDGF-B过表达前后SGC7901和BGC823胃癌细胞中ERK-1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达没有明显差异(P0.05);PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞中AKT-1蛋白表达明显高于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05)。共培养的PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞中AKT-1和ERK-1蛋白及mRNA的表达明显高于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05)。上皮间质化相关指标E-cadherin蛋白及mRNA在共培养的PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞中的表达明显低于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05);上皮间质化相关指标N-cadherin蛋白及mRNA在PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞中的表达明显高于常规SGC7901和BGC823胃癌细胞(P0.05)。常规SGC7901和BGC823胃癌细胞共培养前后AKT-1、ERK-1、N-cadherin和E-cadherin的蛋白表达没有明显差异(P0.05)。PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞共培养前后AKT-1蛋白表达没有明显差异(P0.05),PDGF-B过表达SGC7901和BGC823胃癌细胞共培养前后ERK-1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达有明显差异(P0.05)。 结论:PDGF-B信号通过自分泌作用不能诱导胃癌细胞发生上皮间质化。PDGF-B信号可以通过旁分泌作用并与肿瘤间质细胞相互作用促进胃癌细胞发生上皮间质化,从而促进胃癌进展和转移;其机制可能与PDGF-B信号通路下游的MAPK/ERK通路的激活和肿瘤微环境联合作用诱发胃癌细胞上皮间质化有关。PDGF-B信号通路可能是胃癌有效的治疗靶点之一。


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