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在线衍生—高效液相色谱法同时测定血浆色氨酸及其代谢物

冯成亚  
【摘要】:目的: 1.建立一种在线衍生高效液相色谱紫外-荧光法同时测定血浆中色氨酸(tryptophan,Trp),犬尿氨酸(kynurenine,Kyn),5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid,5-Hiaa)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,Kyna)的浓度。 2.用所建立的方法测定正常孕妇,糖尿病患者,肝硬化患者和健康对照组血浆中Trp,Kyn,5-Hiaa和Kyna的含量,从而更全面地了解人体内不同生理和病理状态下Trp代谢情况。 方法: 1.采用Hypersil C18柱(250mm×4.0mm;5μm)分离,以3-硝基酪氨酸(3-N-Tyr)为内标(IS)。流动相为250mmol/L醋酸锌溶液(pH5.5)-乙腈(95:5,v/v);流速0.8ml/min;柱温30℃;进样量:50μL;紫外检测波长程序:0.00~13.00min,360nm;13.01~17.00min,302nm。荧光检测波长程序:0.00~10.00min,激发光波长(Ex)和发射光波长(Em)分别为278nm和343nm;10.01~14.00min,Ex和Em分别为244nm和400nm;14.01~17.00min,Ex和Em分别为302nm和400nm;分析时间18min。 2.利用该方法测定糖尿病患者(n=101),正常孕妇(n=70),肝硬化患者(n=68)和健康对照组血浆(n=54)中Trp,Kyn,5-Hiaa和Kyna的含量。 结果: 1.5-Hiaa,Kyn,3-N-Tyr,Kyna和Trp保留时间分别为6.7,9.0,11.4,13.5,16.1min。5-Hiaa,Kyn,Kyna和Trp线性范围分别为:3.27~104.60nmol/L,0.32~15.36μmol/L,14.0~464.8nmol/L和2.5~320.0μmol/L,最低检测限分别为:1.22nmol/L,0.048μmol/L,1.29nmol/L和0.54μmol/L。4种物质的平均回收率为91﹪~113﹪,日内和日间变异系数均小于5﹪。 2.糖尿病患者血浆中5-Hiaa,Kyn,Kyna,5-Hiaa/Trp和Kyn/Trp均高于正常对照组(p0.01),两组间的差异具有统计学意义。 3.正常孕妇与正常对照组相比,Kyn,Kyna和Kyna/Kyn比值均降低(p0.05),而5-Hiaa和Trp含量无显著性差异。 4.肝硬化患者与正常对照组相比,Trp显著降低(p0.01),而5-Hiaa,Kyn/Trp,Kyn,Kyna,和5-Hiaa/Trp均增加(p0.05)。肝硬化患者白蛋白与Kyn浓度正相关,谷草转氨酶(AST)与5-Hiaa浓度正相关,白球比值与Trp浓度正相关。 结论: 1.本文建立了一种在线衍生高效液相色谱-紫外/荧光法同时检测血浆中Trp,Kyn,5-Hiaa和Kyna含量,该方法具有快速,灵敏,简便的特点,适用于临床常规检测和科学研究。 2.用所建立的方法分析了正常孕妇,糖尿病患者及肝硬化患者体内Trp代谢,发现这3组人群中均存在Trp代谢紊乱。正常孕妇体内Trp代谢增加,糖尿病患者Trp代谢增强,肝硬化患者Trp代谢显著增强。且肝硬化患者白蛋白和AST浓度及白球比值与Trp代谢具有相关性。


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