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分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用及其分布研究

张红梅  
【摘要】:目的探讨分枝杆菌噬菌体D29与巨噬细胞的相互作用,并分析D29在巨噬细胞内结核分枝杆菌内外的滴度变化,为探讨D29用于治疗结核病的机制及确定给药剂量提供实验参考。 方法将体外培养的巨噬细胞在加入D29不同时间后裂解,测定D29滴度,同时在加入D2912h后收集细胞上清液,ELISA法检测一氧化氮(NO)和白细胞介素12(IL-12)水平;将D29加入到已吞噬结核菌的巨噬细胞中,于不同时间采用荧光定量PCR测定D29在结核菌内外分布的滴度。 结果1×108噬菌斑形成单位(PFU) D29加入巨噬细胞培养基后,20min时有2.5×104PFU被巨噬细胞吞噬,180min后D29大量失活,190min时巨噬细胞内已无存活的D29;细胞上清液中NO和IL-12水平与巨噬细胞空白组比较差异无统计学意义,但明显少于LPS阳性对照组(P0.05);D29与吞噬了结核菌的巨噬细胞作用30min时,即有D29进入结核菌内,作用40min和50min时,D29在结核菌内外滴度均有一过性升高,此后结核菌内外滴度均下降,作用190min和210min时D29量大幅度减少,48h后几乎不能检测到D29。 结论D29被巨噬细胞吞噬后会失活,并且D29不影响巨噬细胞的免疫功能;D29能够进入被巨噬细胞吞噬的结核菌中,开始时随着时间延长,结核菌中的D29数量增多;随后D29数量减少,48h后消失。


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