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Notch信号通路在小鼠椎间盘细胞中的差异表达调控作用

曹光彪  
【摘要】:目的 探讨Notch信号转导通路相关分子在小鼠脊椎生长发育过程中的差异性表达谱,并进一步研究Notch信号分子Dll-1和Jag-1对BMP-2诱导椎间盘髓核(nucleus pulpous, sNP)细胞体外成软骨分化的影响。 方法 采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘的Notch信号分子表达情况,分析筛选出对调控脊椎正常生长发育的重要信号分子Dll-1、Jag-1,并采用免疫组织化学方法进一步验证。重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、BMP-2在HEK293细胞中包装扩展获得高滴度病毒,将NP细胞分为Ad-GFP+Ad-RFP对照组(A组)、Ad-BMP-2+Ad-RFP组(B组)、Ad-BMP-2+Ad-Dll-1组(C组)、Ad-BMP-2+Ad-Jag-1组(D组),RT-PCR检测BMP2、Dll-1、Jag-1在其中的表达水平,检测软骨细胞特征性产物蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2A1)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨基质分泌情况。 结果 1、小鼠脊椎生长发育过程中,Notch信号分子表达总体呈下降趋势,其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著,在调节脊椎发生过程中起重要调节作用。 2、BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化,致使ACAN和COL2A1表达增高,甲苯胺蓝染色阳性增强。 3、Dll-1、Jag-1二者间有一定的协同刺激表达作用,并且其过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应。 结论 Notch信号分子尤其是Dll-1、Jag-1在正常脊椎发生过程中发挥重要调节作用,并对椎间盘软骨细胞的成熟分化有明显负性调节作用。为进一步研究Notch信号转导通路与脊椎发育性疾病的关系奠定了重要基础


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