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骨髓基质细胞介导的CCL5对人肝癌细胞Huh7的作用及机制研究

白慧丽  
【摘要】:目的:本文旨在探讨肿瘤微环境中骨髓基质细胞(MSCs)介导的CCL5对肝癌细胞的作用及机制研究,为临床治疗肿瘤转移提供新的线索。 方法:采用HS-5条件培养基(HS-5-CM)处理人肝癌细胞Huh7,分别通过MTT、流式细胞术(flow cytometer, FCM)、划痕和Transwell实验分析对Huh7细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响;体内裸鼠成瘤实验验证HS-5细胞对Huh7细胞肿瘤生长影响。 采用Transwell小室间接共培养Huh7细胞与HS-5细胞,RT-PCR测定共培养前后细胞中趋化因子及其受体变化;qRT-PCR和ELISA实验测定共培养后HS-5细胞中CCL5mRNA和蛋白水平变化。此外应用anti-CCL5Ab处理HS-5-CM以减少培养液中CCL5的表达,FCM和Transwell实验测定对Huh7细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响;分别应用PI3K抑制剂LY294002、ERK1/2抑制剂PD98059和anti-CCL5Ab,Western blot测定共培养后Huh7细胞中PI3K-Akt和ERK1/2MAPK本课题由NSFC31200971项目资助.信号通路的激活,Transwell测定Huh7细胞迁移和侵袭作用,最后ELISA检测上清中CCL5蛋白水平变化。 结果:HS-5细胞可以促进Huh7细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡作用;体内裸鼠成瘤实验证明HS-5细胞促进肝癌肿瘤生长。 Transwell小室间接共培养后,HS-5细胞中CCL5的mRNA和蛋白水平表达增高;anti-CCL5Ab抑制HS-5-CM诱导的Huh7细胞的迁移和侵袭能力;LY294002和anti-CCL5Ab可有效抑制共培养后PI3K-Akt信号通路的Akt磷酸化激活,减少CCL5的分泌,并抑制HS-5-CM诱导的Huh7细胞的迁移和侵袭作用。 结论:MSCs可以促进Huh7细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡作用。MSCs分泌的CCL5通过激活PI3K-Akt信号通路促进Huh7细胞迁移和侵袭能力。


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