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小鼠睾丸损伤后环孢素A对Fas系统的影响

舒勇  
【摘要】: 目的:研究昆明小鼠单侧睾丸损伤及伤后环孢素A(CsA,下同)对对侧生精功能和Fas系统表达的影响。 方法: 1.按随机分组的原则,将60只昆明小鼠随机分为四组:A组为正常对照,B组为右侧睾丸用冰乙酸损伤,C组为右侧睾丸冰乙酸损伤后6小时切除损伤睾丸,D组为右侧睾丸冰乙酸损伤后6小时内开始腹腔注射CsA(10mg/kg),连续四周。 2.通过眼眦静脉取血,以正常睾丸组织切片作为抗原,用免疫组织化学的方法检测血清有无睾丸组织的抗体产生。切取所有小鼠的左侧附睾,在2毫升的HBSS液中用玻棒捣碎并在37℃浴箱中孵育30分钟,用台盼蓝染色,计数精子总数及活动精子,进行精子密度和活率测定。 3.每组取2只左侧睾丸用作电镜检查,其余对侧睾丸在中性缓冲福尔马林固定48小时,再在Bouin's液中固定18小时,石蜡包埋切片、HE染色。 4.免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶连结(SP)法检测 WP=5 Fas和FasL的表达,并计数平均每个精曲小管断面的Fas和FasL阳性细胞数。统计方法用SPSS10.0统计软件进行分析。 结果: 1.附睾尾精子密度和活率:所有附睾尾精子在37℃的HBSS中存活良好,均见活动精子,但单侧睾丸用冰乙酸损伤组死亡精子数多,活率下降。单侧睾丸用冰乙酸损伤组附睾尾精子密度和活率显著低于其它组(P0.05)。睾丸损伤后给CsA组与正常对照组及损伤后切除组其附睾尾精子密度和活率无显著性差异(P0.05)。 2.各组HE染色:结果显示右侧睾丸用冰乙酸损伤组左侧睾丸精曲小管内的细胞层数减少,支持细胞和各级生精细胞空泡化变性,精曲小管退形性改变,附睾管内见大量脱落的圆性精子细胞,基底膜未见明显损伤,间质中细胞略有增多。睾丸损伤后给CsA组有好转,仍可见空泡化的各级生精细胞。血清中可以检测到不同程度的抗精子抗体、抗基底膜抗体,用CD3检测淋巴细胞,发现缺乏淋巴细胞。 3.正常睾丸免疫组织化学染色可见Fas和FasL阳性细胞位于特定的生精周期精曲小管内的生精细胞,在生精周期Ⅺ、Ⅻ期精曲小管内各级生精细胞均见表达。其它生精周期的精曲小管内没有阳性细胞。支持细胞未见染色。 4.在一侧睾丸损伤后,阳性染色的精曲小管增多,除Ⅺ、Ⅻ期外的 WP=6 其它生精周期也见阳性细胞,平均精曲小管内的阳性细胞数也增多。一侧睾丸用冰乙酸损伤组的FasL和Fas较对照组升高(P0.05)。损伤后给环孢素A FasL和Fas较B组降低(P0.05) 结论: 1.在昆明小鼠右侧睾丸损伤后对侧附睾精子密度和活率计数会降低,短期内给一定浓度(10mg/kg)的环孢素A能改善精子密度和活率。 2.机体产生的抗体改变了对侧生精环境,未测到淋巴细胞起作用。 3.在各组昆明小鼠Ⅺ-Ⅻ期精曲小管的生精细胞各阶段均有Fas和FasL表达,而支持细胞不表达Fas和FasL。右侧睾丸损伤后Fas和FasL表达的细胞增多,在Ⅺ-Ⅻ期精曲小管以外的精曲小管也见表达。Fas系统不但参与正常精细胞凋亡,而且参与了右侧睾丸冰乙酸损伤后对侧精细胞凋亡。 4.给一定浓度的环孢素A可以抑制Fas和FasL的表达,能降低对侧睾丸精原细胞的凋亡,维持生精功能的稳定。


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