神经干细胞定向分化与移植治疗帕金森病的实验研究

【摘要】： 研究背景与目的：神经干细胞(neural stem cell，NSC)的发现是神经生物学领域的最重要进展之一。NSC不仅对于中枢神经系统发育成熟后不可能再生的理论提出了挑战, 为研究神经发生、神经系统遗传病的发病机制提供了理想的载体，还为神经系统损伤修复和退行性病变的治疗带来了新的希望。NSC的培养扩增是研究的基础，本实验目的在于通过培养了解其生物学特性，为深入研究其体内外分化奠定基础。 方法： 采用体外无血清培养和增殖刺激因子的作用，分离培养人和大鼠胎脑NSC。通过单细胞克隆实验和体外长期传代培养扩增和冻存复苏检测其自我更新能力、增殖能力和生物学特性稳定；免疫细胞化学检测NSC特征性标志nestin表达和分化为神经元和胶质细胞能力；BrdU掺入实验检测细胞增殖状态；通过克隆和细胞计数比较EGF、bFGF对鼠NSC增殖刺激作用，对LIF在人NSC培养中的作用进行探讨。 结果：体外无血清选择性传代培养，获得的NSC能分化为神经细胞和神经胶质细胞，具有多向分化能力；有很强的自我更新能力，经体外20次传代培养后仍然具有克隆形成能力；NSC表达nestin，部分细胞处于增殖活跃期；NSC扩增迅速；传代培养的NSC性能稳定，经长期培养和冻存复苏后保持NSC特点；联合运用EGF、bFGF对NSC增殖作用较单用强；LIF对人NSC长期培养扩增有明显促进作用。 结论：建立了体外培养人和大鼠NSC的方法，培养的NSC表达nestin，有自我更新、多向分化的特点，通过培养细胞大量扩增。EGF、FGF联合作用促进大鼠NSC增殖，LIF能促进人NSC培养扩增。