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树突状细胞在小儿哮喘免疫发病机制中的作用研究

蒋东波  
【摘要】: 支气管哮喘(bronchial asthma)是临床常见的危害颇大的慢性疾病。哮喘的发病率呈逐年上升趋势,且其发病机制至今仍不明确。近年研究发现支气管哮喘最重要的免疫学异常是TH1/TH2细胞比例和功能的失衡。而树突状细胞(dendritic cells, DC)是抗原递呈功能最强的抗原递呈细胞(Antigen presenting cells, APC),是目前发现的唯一能激活初始型T细胞(Na?ve T cells)的APC,其在诱导TH1/TH2型细胞反应的平衡和偏移过程中起关键作用。为探讨小儿哮喘时DC在诱导TH1/TH2细胞分化中的作用及关系,本研究通过粒-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF),白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)和肿瘤坏死因子((Tumor necrosis factor-(,TNF-()联合体外培养诱导哮喘患儿外周血单个核细胞(Peripherial blood mononuclear cells ,PBMC)发育为DC,并观察其形态学变化,流式细胞仪对其进行细胞表面分子鉴定,以及检测其分泌的IL-10、IL-12、IL-18和前列腺素E2(PGE2) 等细胞因子水平和DC的免疫诱导功能,为进一步探讨DC在小儿哮喘免疫发病机制及防治中的作用提供新的思路。主要结果及结论如下: 1.外周血PBMC中粘附细胞在培养12小时后,可见粘附细胞呈圆形。培养3天后观察到胞体出现树突状突起。第4天后,细胞大多呈悬浮生长,为典型DC外形,贴壁细胞开始均呈集落样生长。培养7天后,培养细胞均匀分散在培养基中。至培养第8天时细胞呈DC外形 WP=10 并继续增殖。 2.哮喘及健康对照组儿童外周血PBMC诱导的DC均表达DC相关分化抗原:CD_{1a}、CD_{40}、CD_{80}、CD_{83}、CD_{86}和HLA-DR,同时不具备其它细胞的分化抗原如CD_{14}、CD_{16}、CD_{19}等,哮喘组CD_{86}和HLA-DR较健康对照组均有明显升高;而CD_{40}较健康对照组有明显降低。其余CD分化抗原在两组儿童之间比较无明显差异。 3.哮喘患儿及健康对照组儿童DC均能刺激自体T淋巴细胞、健康同种异体T淋巴细胞和健康同种脐带血初始T淋巴细胞强烈增殖。随刺激细胞数目的增加其促增殖作用增强。 4.哮喘患儿血浆及DC分泌的IL-10、IL-12水平均显著降低,与对照组比较差异显著;哮喘患儿血浆IL-18水平明显升高,而DC分泌的IL-18水平显著降低,与对照组比较差异显著;哮喘患儿血浆及DC分泌的PGE2水平均显著升高,与对照组比较差异显著。 5.哮喘患儿血浆和DC分泌的IL12与PGE2存在明显负相关;而与CD86等相关不显著。 综上,从以上1、2和3点充分说明我们成功的培养出了DC细胞。哮喘患儿可通过其DC表面差异表达CD_{40}、CD_{86}和HLA-DR等协同刺激分子,从而使其激发T淋巴细胞的作用增强。哮喘时血浆及DC分泌的IL-10、IL-12水平均显著降低,血浆IL-18水平升高,DC分泌的IL-18水平降低以及血浆及DC分泌的PGE2水平均明显升高。导致哮喘时TH1/TH2偏移,使TH2型反应亢进,TH1型反应不足,造成气道慢性变态反应性炎症,气道高反应性而致哮喘发作。本研究为小儿哮喘免疫发病机制的研究提供了新的途径,也为小儿哮喘的防治指出了新的方向。


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