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HIFU治疗肿瘤后树突状细胞疫苗诱导的特异性抗肿瘤效应

冯军  
【摘要】:目的:本课题通过观察HIFU治疗小鼠H22肝癌后树突状细胞的变化,探讨HIFU治疗对DC的影响;在此基础上,用HIFU治疗后坏死肝癌组织中的HSP70-肽复合物在体外活化DC,并将与HSP70-肽复合物激活的DC作为肿瘤疫苗免疫同种小鼠,激活免疫系统,观察特异性抗肿瘤免疫应答,为阐明HIFU治疗后机体抗肿瘤免疫功能增强的机制提供实验室依据。 方法:(1)20只接种H22瘤C57BL/6J小鼠,随机分为HIFU组(n=10)及对照组(n=10)。HIFU组接受HIFU治疗,对照组同一时间假照治疗,HIFU机未开电源。14天后取脾细胞进行流式细胞仪检测,观察HIFU术后小鼠体内脾脏成熟DC细胞CD80/CD86、CD205/CD11c的表达。(2)50只C57BL/6J正常小鼠随机分为5组,隔日1次,共3次,皮下注射下述物质2×10~6/ml,0.05ml,A组RPMI1640液-DC疫苗、B组HSP70-S180-肽复合物-DC疫苗、C组H22肿瘤组织粗提物-DC疫苗、D组HIFU治疗后的H22肿瘤组织粗提物-DC疫苗、E组HSP70-H22-肽复合物-DC疫苗。第7天每组取10只小鼠脾脏分离淋巴细胞,MTT法检测对H22细胞毒作用; 重庆医科大学硕士学位论文 并取脾淋巴细胞与H22共培养24小时上清液ELISA法检测TNF一a、 INF一丫,(3)1 00只正常e57BL/6J小鼠,随机分为5组,背部皮下接 种不同DC疫苗0.05ml,隔日1次,共3次,于末次免疫后7一10天 背部皮下接种H22细胞1 x 105个/ml 0.o2ml。观察肿瘤发生率、肿 瘤体积、转移发生率、生存曲线、生存率,MTT法观察DC疫苗体 内激活T淋巴细胞成为CTL细胞后的细胞毒活性。 结果:(1)HIFU治疗组及荷瘤对照组成熟DC细胞CD80/C D86、 CD205/CD 1 le的表达分别为4.03士1 .36%、2.02士0.83%;2.44士 2.14%、1 .47士1 .12%,HIFU治疗组与荷瘤对照组有显著差异(P 0.05)。(2)A组RPMI 1 640液一DC疫苗、B组HSP7O一5 1 80一肤复合物 一DC疫苗、C组H22肿瘤组织粗提物一DC疫苗、D组HIFU治疗后 的H22肿瘤组织粗提物一DC疫苗、E组HSP70一H22一肤复合物一DC 疫苗,免疫小鼠7天后的脾CTL细胞毒性分别为13 .14士2.67%、 14.08士3.66%、29.87士3.64%、45.04士3.29%、57.08士5.02%,HIFU后 H22粗提物组、HSP70一H22一肤复合物组均较其它三组有明显差异。 ELIsA法检测A、B、C、D、E组免疫小鼠7天后脾Thl细胞活化 时分泌的细胞因子TNF一a、INF一丫分别为1 2.64士s.46pg/ml、 54.55士6.64Pg/ml、27.18士12.62Pg/ml、39.72士9.25Pg/ml 53.9士7.76Pg/ml;82.15士13.15Pg/ml、258.06士ZI.12Pg/ml 178.39士15.17Pg/ml、214.38士20.84Pg/ml、259.23士17.12pg/ml。结果 于各组杀伤率一致。(3)A组一E组分别免疫正常小鼠9天后,接种 重庆医科大学硕士学位论文 2xl06个H22肝癌细胞7天时的成瘤率分别为70%、80%、70%、 20%、20%,35天时的转移率分别是70%、50%、60%、60%、30%, 49天时的生存率分别是。、o、o、o、70%。接种2 xl06个H22肝 癌细胞后9天取脾单个核细胞MTT法检测小鼠的脾CTL细胞毒性 分别为11.50士2.37%、12.21土2.33%、22.69士2.90%、36.17士4.69% 54.05士7.65%。 结论:(l)HIFU治疗后,可能与肿瘤坏死灶中肿瘤特异性抗原 表达增加,能有效的刺激DC成熟。(2) HIFU治疗后,坏死灶中 HSP7O一H22一肤复合物制备DC疫苗能够体内激活CTL和Thl细胞, 使CTL细胞体外对同种肿瘤细胞发挥特异性杀伤活性,使活化Thl 分泌TNF_a、INF_Y增多。(3)Hsp70一H22一肤复合物一DC一疫苗能 够体内激活T淋巴细胞,使初始型T淋巴细胞活化成CTL细胞, 体内发挥对同种肿瘤细胞特异性抗肿瘤免疫保护作用。


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