肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究

【摘要】：目的:肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration, ALR)是Hagiya 等于 1994 年对肝刺激因子(Hepatic stimulatory substance,HSS) 的进一步研究时克隆的一种非特异性、具有热稳定性、不同于肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor , HGF)的促肝细胞再生因子。前期研究发现 ALR 在体外能刺激肝癌细胞株增殖,并呈剂量依赖性,并且将 ALR 表达质粒转入肝癌细胞中,发现 ALR 能明显促进肝癌细胞增殖和增强其抗损伤的能力,这些研究结果提示 ALR 与肝癌的发生、 发展可能存在一定关系。我们新近对正常肝组织和肝癌组织的研究中发现正常肝细胞几乎不表达 ALR,而肝癌细胞却高表达 ALR,但是高表达的意义尚不明确。并且还发现 ALR 对 ConA 激活的单个核细胞具有很强的抑制作用。因此,推测 ALR 作为一种生长因子和免疫抑制因子可能在肝癌的自主性生长以及肝癌逃避机体免疫监视中发挥了重要的作用。但是其在肝癌发生、发展中的具体作用及地位尚不清楚。本研究拟在体内、外通过在核酸及蛋白质水平阻断内源性人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration, hALR)的表达和分泌后,观察肝癌的生长是否受影响;以及观察 rALR 对肿瘤细胞膜抗原激活的大鼠外周血单个核细胞增殖作用的影响,以明确 ALR 在肝癌发生、发展中的作用及地位。因此,本实验根据 hALR 的基因序列,设计、构建针对 hALR 基因编码区能够产生发夹结构的小干扰 RNA(small interfering RNA, siRNA)的载体质粒,将其转染 HepG2 细胞,观察对hALR 表达的影响,以及对体外培养的 HepG2 细胞和裸鼠移植瘤生长的影响;同时观察 anti-hALR McAb (anti-hALR monoclonal antibody)中和 hALR 后对 HepG2 细胞增殖和裸鼠移植瘤生长的抑制作用;用