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血红素氧合酶-1对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响

刘胜春  
【摘要】:目的 : 为解决移植器官短决的难题,探索异种器官移植的可行性,为异种器官移植进入临床提供理论基础。本实验借助 NIH 小鼠-Wistar 大鼠颈部异位心脏移植模型,研究 HO-1 在 NIH 小鼠-Wistar 大鼠颈部异位移植心脏中的表达;并通过热休克预处理及 CoPP 诱导 NIH 小鼠 HO-1的表达评价 HO-1 对 DXR 的影响以及 HO-1 对小鼠-大鼠异种移植物时免疫反应的作用。 方法、材料和结果 1,将袖套法建立的小鼠→大鼠心脏移植模型中受体的麻醉方式由常规一次腹腔内注射,改进为首次注射半量,术中逐渐增加,并在改进组单独处理肺静脉建立 NIH-Wistar 颈部异位心脏移植模型。手术成功率分别为 80%(16/20)及 90%(18/20)。异种心脏移植平均成活时间2.10 土 0.7379 天(n=34)。改进前平均失血量 0.82±0.24ml,改进后为0.32±0.17ml(t=2.6321,P0.01)。手术时间常规组 115.25±30.20 分,改进组 86.31±14.56 分(t= 3.8603,P﹤0.001)。空白对照组与移植组血浆 IgA,IgG,IgM,C3,C4 没有差异(t=0.5460,P0.05)。被排斥的心脏体积增大,显微镜下见被排斥心脏的心肌中有广泛血管内血栓形 成及出血,炎症细胞浸润,部分心肌凝固性坏死及溶解。所有被排斥心脏中未见补体 C3沉积(0/34),但 70.59%(24/34)有 IgG 沉积。所有排斥心脏中的浸润炎症细胞中均见有大量 CD68 阳性细胞,CD68弥漫性分布于巨噬胞浆中。该模型可用于 DXR 研究。改进措施可降低出血等并发症的发生并缩短手术时间。 2. 利用 DXR 心脏移植模型,借助免疫组化、RT-PCR、Westrn Blot蛋白印迹杂交、以及血红素氧合酶活性测定 NIH-Wistar 异位心脏移植后 HO-1mRNA 表达、HO-1 蛋白表达,以及 HO-1 酶活性的变化规律。结果显示移植心脏中HO-1蛋白主要表达在血管内皮及周围邻近心肌细胞,浸润的炎症细胞中有表达。NIH-Wistar 心脏移植 6 小时后移植物组织中的 HO-1mRNA 开始增加(0.03209±0.012051),24 小时达到高峰(0.16752 ± 0.0304496) , 48 小 时 以 后 已 开 始 下 降 (0.150875 ±0.027486)。而其蛋白表达高峰则在 48 小时,HO-1 酶活性与蛋白表达基本一致。说明器官移植后移植物组织内的 HO-1 蛋白表达及其酶活性峰值略迟于 mRNA,但其表达高峰多在 24-48 小时内,在接近发生排斥反应时 HO-1mRNA 及蛋白表达均已在下降。协调性异种器官移植通常移植后 2~3 天发生延迟性异种移植排斥反应,用于 HO-1 对器官移植影响的研究较为合适。 3.热休克预处理 NIH 小鼠诱导出 HO-1 表达,借助 NIH-Wistar 大鼠异位心脏移植模型,探讨 HO-1 对 DXR 的影响。 采用自制取暖器加热法对 NIH 小鼠进行热休克预处理,分别于热休克后 1h,6h,12h,24h,48h,72h 各取 6 只小鼠,处死后切取肝脏、脾脏和心脏,HO-1 免疫组


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