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诱骗寡核苷酸靶向阻断STAT5逆转白血病K562细胞恶性表型

王小中  
【摘要】:慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是一种获得 性 造 血 干 细 胞 克 隆 增 殖 性 血 液 系 统 恶 性 肿 瘤 , 其 病 因 与t(9;22)(q34;q11)易位形成特异性 bcr/abl 融合基因,产生具有强烈酪氨酸 激 酶 活 性 的 BCR/ABL 融 合 蛋 白 , 异 常 激 活 PI3K (phosphatidylinositol-3 kinase) 、 RAS(renin-angiotensin system) 和STAT(signal transducer and activator of transcription)等信号转导通路,导致细胞的恶性转化有关。尽管其具体分子机制仍然有待阐明,但越来越多的研究提示 STAT5 在 CML 发生发展过程中起重要作用。有鉴于此,我们选择 STAT5 作为切入点,探索运用转录因子诱骗(transcription factor decoy)这一新策略抑制 STAT5 靶基因表达;从分子水平阐明组成型激活的 STAT5 在 BCR/ABL 致细胞恶性转化过程中的作用机制;并通过体内外实验初步评价运用诱骗核苷酸抑制 STAT5 通路作为慢粒治疗靶点的可行性。实验从三个方面进行研究,主要方法、结果及结论如下: 1. 诱骗寡核苷酸抑制 STAT5 靶基因表达的可行性研究 诱骗寡核苷酸转染靶细胞效率及稳定性实验、细胞内定位:应用阳离子脂质体 lipofectin 介导的转染方法,将绿色荧光染料 FAM 标记的 STAT5 诱骗寡核苷酸(Decoy ODN)导入 K562 细胞中,于随后的不同时间点分别取部分细胞离心制片,荧光显微镜下计数荧光细胞的百分率;以蓝色荧光染料DAPI染色,在激光共聚焦显微镜下观察Decoy ODN 在细胞内的分布。结果发现 Decoy ODN 能高效转染 K562 细胞,转染阳性率达 95.2%,并且在细胞内至少稳定 3 天(阳性率 76.0%)。


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