大鼠缺血再灌注心肌蛋白的蛋白质组学二维凝胶电泳分析及卡维地洛的干预作用

【摘要】：目的: 构建大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤模型,应用蛋白质组学二维凝胶电泳(2-DE)技术,结合网上 2-DE 数据库查询,研究 I/R损伤后心肌蛋白表达的差异变化,并观察具有心脏保护作用的药物——卡维地洛(CVD)干预后对心肌蛋白表达的影响,进而探讨心肌 I/R损伤的可能病理机制及 CVD 心肌保护作用的药理机制。 方法: 结扎大鼠冠脉左前降支(LAD)缺血 30 分钟后松结再灌注2 小时构建大鼠心肌 I/R 损伤模型。CVD 于术前连续 7 天(5mg/kg·d)灌胃给药。将大鼠分为假手术组(Sham 组)、I/R 损伤组(I/R 组)和 CVD处理组(CVD 组)。测定血清肌酸激酶-MB 型(CK-MB)和丙二醛(MDA)。基于心肌细胞的特点,为提高分辨率,从心肌组织匀浆中提取富胞浆蛋白的亚蛋白质组作为研究样本。经蛋白定量,确定组间无差异提取后,通过等电聚焦(IEF)和 SDS-PAGE 垂直电泳对其进行双向分离。银染后,扫描获取 2-DE 图谱(每组 3 只大鼠 3 张图谱)。应用 PDQuest分析软件对扫描图进行蛋白点检测、点匹配,对组间的蛋白点进行定性定量差异表达分析。评价 2-DE 图谱的重复性。搜索对比网上大鼠心室肌 2-DE 数据库中已知蛋白点的信息,对差异表达蛋白进行鉴定。 结果:(1)血清 MDA 在 I/R 损伤后明显升高(P0.05),而经 CVD预处理后 MDA 明显下降(P0.01)。CK-MB 在各组间无差异变化(P0.05)。(2)2-DE 凝胶上平均检测出 453±66 个有效点,其中 278个点在匹配组的每张胶上都完全匹配,365 个点在 Sham 组的所有胶完