运用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白的实验研究

【摘要】： 第一部分乙型肝炎病毒PreS1融合蛋白的表达、纯化及性质鉴定目的:构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达,获得纯化的PreS1融合蛋白,并对其性质进行鉴定,为进一步从人肝细胞cDNA表达文库中筛选PreS1相互作用蛋白奠定基础。方法:采用PCR法扩增含HindⅢ与XbaⅠ酶切位点的PreS1基因片段,原核表达载体pGST-MOLUC及PCR产物经双酶切后,用T4DNA连接酶将两者连接并转化到大肠杆菌JM109构建并筛选重组质粒。随后将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测。以谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶为填料进一步采用亲和层析纯化融合蛋白。结果:用PCR方法扩增出与预期大小一致的目的基因片段。重组质粒经双酶切鉴定及测序分析证实重组质粒克隆成功,命名为pGST–PreS1。转化表达宿主菌后成功诱导出分子量为37kD的GST -PreS1融合蛋白,与预期分子量相符,诱导表达融合蛋白约占总菌蛋白的10%左右。Western-blot检测表明诱导表达的融合蛋白能分别与抗GST的

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前20条

1	汤丽霞,马文煜,张富泉;乙型肝炎病毒preS基因DNA免疫小鼠诱导产生抗preS_2抗体[J];生物技术通讯;1997年Z1期
2	张正;用单克隆抗-PreS_2抗体建立PreS_2检测试剂盒的研究及其质控的初步探讨[J];北京大学学报(医学版);1989年03期
3	郭晓兰,邓健康,朱道银,唐恩洁;HBV preS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建和表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年05期
4	曾庆,金冬雁,周园,侯云德;乙型肝炎病毒PreS2蛋白在大肠杆菌中的表达[J];病毒学报;1993年02期
5	沈肖方,李建远,王海燕,王学波,靳绍华,刘芙君,刘运祥;IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年11期
6	关庆东,王立新,郭强,张进平,徐薇,王缨,熊思东;C3d增强基因免疫诱导的小鼠抗乙型肝炎病毒特异性免疫应答[J];中华医学杂志;2005年02期
7	孙明颢,叶林伯,郜金荣,贺石汉,吴正辉;乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达[J];中国病毒学;2003年02期
8	汤丽霞,马文煜,张富泉,杨晓峰,李元,任君平,黄庆生,肖毅;乙型肝炎病毒pre S基因真核表达质粒诱导小鼠特异性抗体反应的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年04期
9	巴月,訾晓渊,张南,熊俊,张树忠,李文林,李建秀,吴逸明,胡以平;HBV preS2-S DNA免疫诱导小鼠体液免疫应答[J];第二军医大学学报;2005年03期
10	汤丽霞,马文煜,杨晓峰,张富泉,任君萍;IL-2-preS融合基因真核表达载体的构建与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;1997年01期
11	李迎春，徐谐，陈作义，江垣，李光地;乙肝病毒preS抗原决定簇与核心抗原的融合表达[J];生物化学与生物物理学报;1996年04期
12	关庆东,王立新,汪晓华,郭强,郑秀娟,熊思东;C3d对基因免疫诱导的HBV特异性体液免疫应答的调节作用[J];现代免疫学;2004年04期
13	刁憬瑜,蔡美英,封萍,张子康,魏大鹏,雷定华;正常人肝细胞HBV PreS2相关抗原的研究[J];免疫学杂志;1993年03期
14	杨剑莹,惠静毅,李光地,汪垣,袁汉英,李育阳;带有PreS的重组乙肝表面抗原在毕赤酵母中的表达[J];生物化学与生物物理学报;2000年02期
15	谢尧,陶其敏;基因免疫中HBV preS对HCV E2蛋白免疫原性的调控[J];中华微生物学和免疫学杂志;1999年03期
16	谢尧,陶其敏;丙型肝炎病毒E2及preS融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达[J];中华医学杂志;1999年02期
17	李明,王垒,邱海英,周翊钟,陆长德;HBV整合片段对人PCNA基因启动子的调控[J];生物化学与生物物理学报;1997年04期
18	程云，罗清华，周继文，杨守纯，韩风连，戎广亚，曹阳，季伟;HBV PreS2单链噬菌体抗体基因在噬菌体载体中的克隆及初步表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;1995年01期
19	杨瑞丽,任学毅,赵秀玲,姜晓红,金勇丰,张耀洲;家蚕蛹表达乙肝表面抗原中蛋白免疫原性的研究[J];农业生物技术学报;2002年04期
20	徐丽宏,梁国栋,付士红,宋宏,王大维,苏乃伦,夏国良,张智清;乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达[J];病毒学报;2003年03期

中国重要会议论文全文数据库

前10条

1	Jürgen Soll;;Regulation of protein import into chloroplast[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
2	马春红;孙汶生;田培坤;刘素侠;高立芬;张利宁;王晓燕;韩丽辉;梁晓红;;AFP增强型四元复合体介导preS2反义RNA在肝癌细胞中的表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
3	魏萍;冯永堂;宫伟雁;魏兵;鞠吉雨;苗乃法;牟东珍;吴国庆;孟洁;;乙型肝炎病毒PreS反义基因真核表达载体的构建及体外抗HBV病毒的研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
4	刘素侠;孙汶生;曹英林;马春红;丁培芳;韩丽辉;;HBV preS2起始区反义核酸对裸鼠人肝癌模型的抑瘤研究[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
5	黄惠宜;;250例慢性乙型肝炎患者的HBVDNA、HBsAg、HBeAg与HBVpreS1-Ag临床关系的探讨[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
6	高丰光;王迎伟;孙汶生;曾令宇;王玉龙;周峰;;HBV整合的致癌性研究[A];第6次全国微生物学与免疫学大会论文摘要汇编[C];2004年
7	黄炎生;;图形处理程序设计的几点技巧[A];中国土木工程学会计算机应用分会第七届年会论文集[C];1999年
8	丁培芳;孙汶生;王勤友;马春红;;HBVPreS2反义核酸对HepG_2 2.2.15细胞系HLA-Ⅰ类抗原表达及生物活性的影响[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
9	王红霞;孟庆文;刘永刚;施建忠;孔宪刚;冉多良;吴东来;;SARS冠状病毒未知蛋白5的原核表达[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
10	余文峰;朱松林;程祖海;;引射式气动窗口的密封性能及光束质量(英文)[A];湖北省激光学会论文集[C];2000年

中国博士学位论文全文数据库

前10条

1	艾香英;重型肝炎与HBV PreS区基因突变的关系研究及中医干预的疗效观察[D];广州中医药大学;2013年
2	杨瑞丽;家蚕/BmNPV表达载体系统高效表达人乙肝表面抗原（PreS2+S）及表达产物免疫原性的研究[D];浙江大学;2002年
3	刘伟侠;显性负性突变体融合蛋白PreS2-TLM-ScFv-HBcDN抑制乙肝病毒复制的研究[D];浙江大学;2012年
4	陈红梅;融合细胞因子影响HBV preS2S基因疫苗免疫效果的初步研究[D];第四军医大学;2004年
5	于国栋;[D];广东外语外贸大学;2001年
6	罗源;丙型肝炎病毒高变区1对HCV E2蛋白免疫原性抑制作用研究[D];第二军医大学;2010年
7	吴炜;前S2基因变异及HBV特异性免疫复合物在重型乙型肝炎发病中的作用[D];浙江大学;2003年
8	许红梅;经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲体内HBV PreS/S准种序列及EnhⅡ/CP/PreC变异特点的研究[D];重庆医科大学;2002年
9	胡维国;乙肝病毒大分子表面抗原PreS1区相关片段的表达、免疫性质及应用[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2004年
10	刘红;HBV蛋白相关免疫应答致HBV转基因小鼠肝组织病理损伤的研究[D];郑州大学;2003年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	刘石柱;PreS1感染决定区随机化HBV库的构建及其感染常用小动物的初步研究[D];河北医科大学;2012年
2	张祥;PreS-Tat真核表达载体的构建及表达[D];郑州大学;2011年
3	XIE JING;[D];广东外语外贸大学;2001年
4	刘高峰;乙型肝炎病毒（HBV）颗粒性抗原转基因番茄植株的构建及鉴定[D];第一军医大学;2004年
5	华占楼;云南少数民族地区乙型肝炎病毒功能基因变异的研究[D];第三军医大学;2004年
6	陈红梅;乙型肝炎病毒S基因与干扰素融合基因真核重组载体的构建及其表达的初步研究[D];第四军医大学;2001年
7	苏小平;乙型肝炎病毒preS2-S基因（adr亚型）转基因小鼠的建立[D];第二军医大学;2003年
8	张丽;携HBV PreS1重组腺病毒基因治疗载体对肝细胞嗜向性的研究[D];重庆医科大学;2013年
9	朱一望;霍乱毒素B亚基乙肝表面抗原中蛋白融合基因在家蚕核型多角体病毒载体系统中的表达研究[D];浙江大学;2004年
10	赵亚琴;定点突变对八肋游仆虫中心蛋白功能及性质的影响[D];山西大学;2004年

中国重要报纸全文数据库

前5条

1	陈孝强;自动维护Windows XP另辟蹊径[N];中国电脑教育报;2003年
2	重庆贺锐;“超级格式化”病毒现身网络[N];电脑报;2003年
3	王勋彪;超大剂量抗癌增加心血管病风险[N];中国医药报;2004年
4	尹智;辉瑞受困“西乐葆”：30亿美元市场危机[N];东方早报;2005年
5	文建平赵贵英何宏宇;市场呼唤高效药物产业化[N];医药经济报;2004年

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