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运用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白的实验研究

何茂锐  
【摘要】: 第一部分 乙型肝炎病毒PreS1融合蛋白的表达、纯化及性质鉴定 目的:构建含乙型肝炎病毒(HBV)PreS1基因的原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达,获得纯化的PreS1融合蛋白,并对其性质进行鉴定,为进一步从人肝细胞cDNA表达文库中筛选PreS1相互作用蛋白奠定基础。 方法:采用PCR法扩增含HindⅢ与XbaⅠ酶切位点的PreS1基因片段,原核表达载体pGST-MOLUC及PCR产物经双酶切后,用T4DNA连接酶将两者连接并转化到大肠杆菌JM109构建并筛选重组质粒。随后将重组质粒转入表达宿主菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE电泳分析和Western-blot检测。以谷胱甘肽-Sepharose 4B凝胶为填料进一步采用亲和层析纯化融合蛋白。 结果:用PCR方法扩增出与预期大小一致的目的基因片段。重组质粒经双酶切鉴定及测序分析证实重组质粒克隆成功,命名为pGST–PreS1。转化表达宿主菌后成功诱导出分子量为37kD的GST -PreS1融合蛋白,与预期分子量相符,诱导表达融合蛋白约占总菌蛋白的10%左右。Western-blot检测表明诱导表达的融合蛋白能分别与抗GST的


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