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CO_2气腹对人宫颈癌CaSki细胞ERK_(1/2)和PI3K/Akt信号转导通路活性影响的研究

李刚  
【摘要】: 目的:通过研究腹腔镜CO_2气腹对人宫颈癌CaSki细胞ERK_(1/2)和PI3K/Akt信号转导通路核心蛋白表达的影响,以及在有效阻断上述信号转导通路活性后,CO_2气腹对人宫颈癌细胞生长的影响,探讨CO_2气腹促进人宫颈癌细胞生长的相关机制,探索减弱CO_2气腹促进人宫颈癌细胞生长的新途径。 方法: 1、实验分组:对照组,CO_2气腹组(压力为14mmHg,时间为2h),实验组1~3(细胞先经终浓度为25、50及100μmol/l的ERK_(1/2)信号转导通路特异性抑制剂PD98059孵育,然后按CO_2气腹组处理),实验组Ⅰ~Ⅲ(细胞先经终浓度为20、40及60μmol/l的PI3K/Akt信号转导通路特异性抑制剂LY294002孵育,然后按CO_2气腹组处理)。2、免疫细胞化学法检测对照组与CO_2气腹组p-ERK蛋白表达。3、Western blotting法检测各组p-ERK、ERK、p-Akt及Akt蛋白的表达。4、采用四甲基偶氮唑盐比色方法(MTT法)测定CO_2气腹对人宫颈癌CaSki细胞生长的影响,同时绘制生长曲线。 结果: 1、免疫细胞化学法显示:p-ERK主要表达于细胞质,少量表达于细胞核周与细胞核中。在细胞经CO_2气腹作用后,p-ERK明显表达于细胞质与细胞核。 2、p-ERK和ERK蛋白的表达变化:CO_2气腹组与对照组比较, p-ERK和ERK蛋白表达显著增多(P0.05)。实验组1、2(PD98059终浓度相应为25、50μmol/l)p-ERK蛋白表达较对照组显著增多(P0.05),实验组3(PD98059终浓度为100μmol/l)p-ERK蛋白表达与对照组无显著性差异(P 0.05);实验组1~3 ERK蛋白表达较对照组显著增多(P0.05),CO_2气腹组及各实验组之间ERK蛋白表达无显著差异(P 0.05)。 3、p-Akt和Akt蛋白的表达变化:CO_2气腹组与对照组比较,p-Akt和Akt蛋白表达显著增多(P0.05)。实验组Ⅰ(LY294002终浓度为20μmol/l)p-Akt蛋白表达较对照组显著增多(P0.05),实验组Ⅱ、Ⅲ(LY294002终浓度相应为40、60μmol/l)p-Akt蛋白表达与对照组无显著差异(P 0.05);实验组Ⅰ~ⅢAkt蛋白表达较对照组显著增多(P0.05),CO_2气腹组及各实验组之间Akt蛋白表达无显著差异(P 0.05)。 4、各组生长曲线比较:在CO_2气腹处理后第1~2d,各组细胞吸光度值无显著差异(P 0.05);在CO_2气腹处理后第3~5d,CO_2气腹组各时间点吸光度值显著高于对照组(P0.05);当PD98059终浓度为100μmol/l时,实验组3与对照组的吸光度值无显著性差异(P 0.05);当PD98059终浓度为25、50μmol/l时,实验组1、2各时间点吸光度值显著高于对照组(P0.05);当LY294002终浓度为20μmol/l时,实验组Ⅰ各时间点吸光度值较对照组显著增高(P0.05);当LY294002终浓度为40和60μmol/l时,实验组Ⅱ、Ⅲ各时间点吸光度值与对照组比较,无显著差异(P 0.05)。 结论: CO_2气腹能提高人宫颈癌CaSki细胞ERK_(1/2)和PI3K/Akt信号转导通路活性。通过有效阻断ERK_(1/2)信号转导通路活性上调,能明显减缓CO_2气腹促进人宫颈癌细胞体外生长作用;但有效阻断PI3K/Akt信号转导通路活性上调,CO_2气腹促进人宫颈癌细胞体外生长的效应未明显减弱。CO_2气腹增强ERK_(1/2)信号转导通路活性,可能是CO_2气腹促进人宫颈癌细胞体外生长的机制之一;特异性阻断ERK_(1/2)信号转导通路活性上调,可能成为减缓CO_2气腹促进人宫颈癌细胞生长的新方法。


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