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靶向Hsp90β siRNA对Jurkat细胞生长抑制及化疗敏感性影响的研究

索涛莉  
【摘要】: 目的:探讨RNA干扰技术沉默Hsp90β(Heat shock protein 90 beta)基因表达对Jurkat细胞生长的抑制作用及化疗敏感性的影响。 方法:1.采用Real-Time PCR检测Jurkat、Raji、K562、HL-60细胞株Hsp90βmRNA表达的情况,筛选出高表达Hsp90β的细胞株。2.针对Hsp90β基因全长cDNA序列Hsp90B1(NM_003299.1),设计并构建3对Hsp90β干扰序列和一对随机对照序列,分别克隆获得质粒pSOS-Hsp90βi1, pSOS-Hsp90βi2, pSOS-Hsp90βi3及pSOS-Hsp90βicontrol;应用Lipofectamine? LTX将质粒分别转染入高表达Hsp90β的细胞中, Real-Time PCR检测Hsp90βmRNA水平的变化,筛选出沉默效果最好的Hsp90βsiRNA干扰片段;Western印迹法检测Hsp90β蛋白表达水平。3.MTT法和流式细胞仪检测Hsp90βsiRNA对Jurkat细胞生长抑制作用。4.检测Hsp90βsiRNA对Jurkat细胞化疗敏感性的影响,选不同浓度的长春新碱、阿霉素和依托泊苷,通过MTT法抗癌药物敏感试验检测干扰前后对Jurakt细胞化疗敏感性的变化。 结果:1.Real-Time PCR结果显示Hsp90β在Jurkat细胞中的表达明显高于其它三株白血病细胞株(Raji,K562,HL-60),表达差异有统计学意义(P0.05)。2.应用RNA干扰技术成功构建Hsp90β基因三条特异性真核载体pSOS-Hsp90βi1、2、3并分别转染Jurkat细胞,发现pSOS-Hsp90βi2的沉默效果最明显,Jurkat细胞Hsp90βmRNA及蛋白表达均明显降低(P0.05)。3.Hsp90β基因表达沉默后,Jurkat细胞增殖明显受抑,细胞凋亡率比空白对照组及转染pSOS-Hsp90βicontrol组明显增加,差异具有显著意义(P0.05)。4.转染了pSOS-Hsp90βi2的Jurkat细胞对VCR、ADM和VP16药物的IC50显著低于其余两组(P0.05)。 结论:不同的白血病细胞株Hsp90β的表达存在差异,在Jurkat、Raji、K562、HL-60中Jurkat细胞表达Hsp90β最高;成功构建了3种真核表达载体pSOS-Hsp90βsiRNA,并筛选出沉默效果最好的pSOS-Hsp90βi2;靶向pSOS-Hsp90βi2可下调Hsp90β表达,对人白血病Jurkat细胞有明显的生长抑制作用,显著增加了Jurkat细胞对长春新碱、阿霉素和依托泊苷的敏感性,为白血病基因治疗的靶向性奠定理论依据。


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