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靶向抑制表皮生长因子受体(EGFR)逆转骨肉瘤恶性生物学行为的研究

罗庆  
【摘要】: 目的:探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)家族EGFR、HER2/ErbB-2、HER3/ErbB-3、HER4/ErbB-4及其相关变异体在骨肉瘤中的表达。 方法:通过流式细胞仪、逆转录PCR的方法检测在经典骨肉瘤细胞系143B、MG63、TE85,以及原代骨肉瘤细胞系UCHOS4、7、11、14、15中EGFR、HER2/ErbB-2、HER3/ErbB-3、HER4/ErbB-4及其相关变异体的表达。 结果:(1)经典骨肉瘤细胞系143B、MG63、TE85中表皮生长因子受体EGFR有不同程度的过度表达。(2)骨肉瘤细胞系143B、MG63、TE85,以及原代骨肉瘤细胞系UCHOS4、7、14中有EGFR三型变异体(EGFRvIII,EGFRv3)表达。 结论:证实在骨肉瘤中存在表皮生长因子受体EGFR不同程度的过度表达;部分骨肉瘤中有EGFR三型变异体表达。 目的:构建表达重组抗表皮生长因子受体三型变异体(EGFRvIII)的单链可变区片段(scFv)抗体的重组腺病毒质粒Ad5- scFv- EGFRvIII,转染包装细胞HEK293后收获高滴度的腺病毒感染液。 方法:采用DNA重组技术将表达人源性重组抗表皮生长因子受体三型变异体(EGFRvIII)的单链可变区片段(scFv)抗体的基因定向克隆于细胞膜靶向定位真核表达载体pDisplay,进一步定向克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrace-TOX,并通过同源重组的方法,与5型腺病毒骨架质粒pAdeasy共转染BJ5183细菌,获得携带抗EGFRvIII-ScFv基因的重组腺病毒,经脂质体法转染293细胞,乒乓交互感染收获高滴度病毒感染液。收获的腺病毒感染骨肉瘤细胞模型,通过RT-PCR、Western-blot方法检测其表达及功能。 结果:(1)成功构建表达人源性重组抗表皮生长因子受体三型变异体(EGFRvIII)的单链可变区片段(scFv)抗体的细胞膜靶向定位真核表达载体。(2)成功构建携带抗EGFRvIII-ScFv基因的重组腺病毒穿梭质粒Ad5- scFv- EGFRvIII,同源重组并收获高滴度腺病毒。(3)RT-PCR以及Western-blot均证实收获的腺病毒能靶向抑制EGFR的表达。 结论:成功构建表达重组抗表皮生长因子受体三型变异体(EGFRvIII)的单链可变区片段(scFv)抗体的重组腺病毒质粒Ad5- scFv- EGFRvIII,转染包装细胞HEK293后收获高滴度的腺病毒AdR- scFv- EGFRvIII,并经RT-PCR以及Western-blot证实能靶向抑制EGFR的表达,为下一步研究奠定基础。 目的:探讨应用表达重组抗表皮生长因子受体三型变异体(EGFRvIII)的单链可变区片段(scFv)抗体的重组腺病毒感染骨肉瘤细胞模型,靶向抑制表皮生长因子受体EGFR后,骨肉瘤在体外、体内实验中肿瘤恶性生物学行为的变化情况。 方法:收获表达重组抗表皮生长因子受体三型变异体(EGFRvIII)的单链可变区片段(scFv)抗体的重组腺病毒,感染骨肉瘤细胞模型143B、MG63、TE85,靶向抑制表皮生长因子受体EGFR后,在体外通过MTT、结晶紫染色、细胞划痕实验,细胞吸附实验,细胞Matrigel迁移等实验探讨骨肉瘤在细胞增殖、粘附、迁移、侵袭等肿瘤恶性生物学行为上的变化情况。体内实验中,感染骨肉瘤动物模型,靶向抑制表皮生长因子受体EGFR后, Xenogen imaging成像技术分析对肿瘤生长的影响。 结果:(1)靶向抑制表皮生长因子受体EGFR后,骨肉瘤细胞模型143B、MG63、TE85细胞增殖、粘附、迁移、侵袭等能力受到明显抑制。(2)Xenogen imaging成像结果表明,靶向抑制表皮生长因子受体EGFR在骨肉瘤的表达,肿瘤生长受到抑制,生长速度减慢,可以明显抑制肿瘤细胞的增殖生长能力。 结论:体外实验证实靶向抑制表皮生长因子受体EGFR在骨肉瘤的表达,可以明显下调肿瘤细胞的增殖、粘附、迁移、侵袭能力,逆转肿瘤的增殖、粘附、迁移、侵袭恶性生物学行为。体内实验证实靶向抑制表皮生长因子受体EGFR在骨肉瘤的表达,可以明显下调肿瘤细胞的增殖生长能力。EGFR可能成为骨肉瘤治疗中极有希望的新靶点。


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