收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

载银纳米抗菌复合骨填充材料治疗兔胫骨慢性骨髓炎的实验研究

卢旻鹏  
【摘要】: 慢性骨髓炎的治疗基本原则之一就是在充分的抗菌素治疗基础上彻底清除病灶。而病灶清除,死骨摘除后常出现不同范围的骨缺损,如骨缺损大,影响了骨干的机械强度和稳定性,则常需要植骨以促进骨愈合。尽管采用了彻底的清创方法,但缺损部位仍有一定数量的细菌残留,当有外来植入物时,这些细菌易大量繁殖,常导致治疗失败。因此,良好的骨填充材料必须既能填充骨缺损又能杀灭残留致病菌。自1980年Klemm应用抗生素骨水泥防治骨组织感染成功后,抗生素的局部应用越来越引起人们的重视。局部药物缓释系统可以直接作用于病变部位,不需血液将药物抗生素携带至病变区域,可在局部获得持续的较高药物浓度,同时保持较低的血药浓度,避免全身系统用药的毒副作用。抗生素骨水泥虽然在治疗慢性骨髓炎临床应用中取得了极大的成功,但其仍有许多不足:(1)由于骨水泥结合时有一个放热过程,温度较高,只可应用于耐高温的有限剂量的抗生素;(2)由于受抗菌谱的影响,加之近年来耐药菌株的增多使其临床应用受到了不同程度的限制;(3)部分抗生素的种类及浓度影响局部骨的生长,局部高的抗生素浓度对成骨样细胞的增殖有影响。(4)感染控制需再次手术取出珠链;(5)骨水泥无成骨作用,不能对骨缺损进行修复。纳米羟基磷灰石/聚酰胺66(n-HA/PA66)复合生物活性人工骨是由我们与四川大学联合开发出的一种新型纳米仿生复合骨修复替代材料,前期研究显示该材料的生物相容性好,机械性能佳,是一种良好的骨替代材料。我们在此基础上成功开发出二氧化钛载银纳米羟基磷灰石/聚酰胺66抗菌复合骨填充材料,本课题研究其体外抗菌特性,细胞毒性,体外Ag+释放特性及体外对MG63成骨样细胞增殖的影响并探讨其作为骨填充材料填充骨髓炎术后骨缺损的可行性及该材料在兔体内的毒副作用,以期为该材料治疗临床慢性骨髓炎术后骨缺损提供实验依据。 目的: 对二氧化钛载银纳米羟基磷灰石/聚酰胺66抗菌复合骨填充材料体外抗菌特性,细胞毒性,体外Ag+释放特性及对MG63成骨样细胞增殖的影响进行研究,建立兔胫骨近端慢性骨髓炎动物模型,并在兔胫骨近端慢性骨髓炎动物模型的基础上,研究其作为骨填充材料治疗骨髓炎术后骨缺损的治疗效果,并研究该材料在兔体内的毒副作用,期望找到一种既具有良好的局部抗感染能力又具有成骨能力的骨填充材料,为慢性骨髓炎的治疗提供一种新型的局部抗菌剂缓释系统,并为其进一步临床应用提供实验依据。 方法:本实验由四部分组成 1、载银纳米抗菌复合骨填充材料体外抗菌及释放特性测定 采用抑菌环试验、菌落数试验及扫描电镜检测载银纳米抗菌复合骨填充材料对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抗菌性能及抗粘附效果;采用原子吸收光谱法检测载银纳米抗菌复合骨填充材料在模拟体液中释放银离子特性;通过MTT法,急性溶血实验检测该材料的生物相容性。 2、载银纳米抗菌复合骨填充材料对成骨样细胞生长的影响 以纳米羟基磷灰石/聚酰胺66为对照,采用相差显微镜、扫描电镜、MTT、碱性磷酸酶ALP检测、钙含量测定等方法从MG63成骨样细胞形态、增殖及生理功能等方面检测载银纳米抗菌复合骨填充材料对MG63成骨样细胞生长的影响。 3、兔胫骨慢性骨髓炎动物模型的建立及评价 采用胫骨近段髓腔注射5%鱼肝油酸钠和不同浓度的金黄色葡萄球菌菌液的方法诱导骨髓炎,并探讨诱导的骨髓炎模型与菌液浓度的关系,为慢性骨髓炎的实验研究提供一种合适的动物模型。 4、载银纳米抗菌复合骨填充材料治疗兔胫骨近段慢性骨髓炎的实验研究及兔体内毒副作用研究 在慢性骨髓炎造模的基础上,常规病灶清除,分别植入载银纳米抗菌复合骨填充材料,载万古霉素骨水泥填充材料,nHA/PA66复合骨填充材料及空白对照组,通过大体标本观察、放射学、细菌学和组织学方法,观察材料局部抗菌效果;通过放射学观察,组织学检查和钙黄绿素荧光标记观察材料成骨能力;并通过检测肝脏、肾脏功能及各脏器中银离子浓度,了解材料在兔体内的毒副作用。 结果: 1、载银纳米抗菌复合骨填充材料体外抗菌及释放特性测定 载银纳米抗菌复合骨填充材料体外对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有明显抗菌作用,尤其对金黄色葡萄球菌,且抗菌能力随银离子含量的增加而加强;该材料在模拟体液中有良好的缓释效果,对L929细胞无毒性,对红细胞不产生毒性或机械损伤,具有良好的生物相容性。 2、载银纳米抗菌复合骨填充材料对MG63成骨样细胞生长的影响 MG63成骨样细胞与材料共培养的倒置相差显微镜可见MG63成骨样细胞在材料周围生长情况良好,且随着培养时间的延长,在材料周围的细胞数量明显增多;扫描电镜显示MG63成骨样细胞在复合材料上生长5天后可见细胞在复合材料上生长状况良好;MTT法结果显示各组细胞的数目都随着培养时间的增加而增加,第七天时抗菌材料组的MTT值与对照组间没有显著性差异(P0.05);MG63成骨样细胞在不同材料上培养和空白对照组的ALP活性随着培养时间的增加而增加,各材料组和对照组在不同的培养时间点的ALP活性无统计学上差异(P0.05);细胞钙离子含量测定显示各组MG63成骨样细胞钙离子含量均随时间延长呈增长趋势。 3、兔胫骨慢性骨髓炎动物模型的建立及评价 G0(注入0.1ml生理盐水)、G1(注入0.1ml 3×107 CFU/ml细菌)、G2(注入0.1ml 3×108 CFU/ml细菌)、G3(注入0.1ml 3×109 CFU/ml细菌)、G4(注入0.3ml 3×109 CFU/ml细菌)、G5(注入0.3ml 6×109 CFU/ml细菌)各组造模后4周,影像学显示均出现不同程度的软组织肿胀,骨密度降低,骨小梁纤细,数目减少,骨小梁间隙加宽,骨皮质变薄,骨溶解,死骨形成;组织学切片显示均出现不同程度的中性嗜酸性粒细胞浸润,骨髓腔内髓细胞不同程度坏死,间质出血;采用兔金黄色葡萄球菌骨髓炎模型严重程度分级大体标本观察和放射学检测标准对所诱导模型进行严重程度分级:G1组属0级,G2组属1~2级,G3组属2~3级,G4组属3~4级,G5组属4级。 4、载银纳米抗菌复合骨填充材料治疗兔胫骨近段慢性骨髓炎的实验研究及兔体内毒副作用研究 4.1载银纳米抗菌复合骨填充材料治疗兔胫骨近段慢性骨髓炎的实验研究 抗菌效果:术后12周对各组Norden改良骨髓炎分值进行统计学分析显示:A组(载银纳米抗菌复合骨填充材料)、B组(载万古霉素骨水泥填充材料)分别与C组(nHA/PA66复合骨填充材料)、D组(空白组)比较,差异有非常显著性(P0.01),A、B组比较差异无统计学意义(P0.05),C、D组比较差异无统计学意义(P0.05);术后12周,大体标本可见A、B组保持较正常外观形状,未发现明显的骨质破坏及髓腔脓液,其中A组材料与骨接触处紧密连接,其余各组标本外形粗大,骨质破坏明显,骨缺损边缘有不规则增生及硬化,其中C组材料与骨接触处连接不紧密,其间可见脓性分泌物;术后4周和8周时,每克标本细菌计数转换成对数后进行统计学分析结果显示:A、B组细菌计数明显小于C、D组,差异有非常显著性(P0.01),A、B组比较,B组细菌计数小于A组,差异有显著性(P0.05),C、D组比较,D组细菌计数小于C组,差异有显著性(P0.05);组织学观察显示术后12周,A、B组炎症反应明显较C、D组轻,B组又较A组炎症反应轻。 成骨效果:术后12周X线显示A组植入的填充材料与周围骨皮质界线模糊,与周围骨组织基本愈合,B、C组材料与周围骨组织未见明显愈合征象;钙黄绿素荧光标记显示术后12周,A组材料与骨界面可见大量绿色荧光,B、C组材料边缘及D组荧光标记明显较A组少;组织学观察显示术后12周, A组胶原数量多,可见编织骨形成,新生骨小梁及新生血管,可见多数成骨细胞,成骨活动明显;B组无编织骨小梁,未见明显胶原存在;C、D组均未见到骨形成,无编织骨小梁,可见部分胶原存在。 4.2载银纳米抗菌复合骨填充材料动物体内毒副作用研究 血清生化检验结果显示,天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平在各时相点实验组与对照组两两比较均无显著性差异(P0.05),实验组内各时相点两两比较均无显著性差异(P0.05);血液中Ag+浓度检测结果显示各时间点实验组中血液中Ag+浓度均低于10ppb;组织学观察显示实验组肝肾均未见异常变化;术后12周时,实验组肝脏、肾脏中Ag+浓度分别为(224.46±83.04) bbp和(88.57±75.72) bbp。 结论: 1、载银纳米抗菌复合骨填充材料体外对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌有明显抗菌作用,尤其对金黄色葡萄球菌,且抗菌能力随银离子含量的增加而加强;在模拟体液中有良好的缓释效果,对L929细胞无毒性,对红细胞不产生毒性或机械损伤,具有良好的生物相容性。 2、载银纳米抗菌复合骨填充材料对MG63成骨样细胞生长没有抑制作用,对成骨样细胞的碱性磷酸酶活性及钙离子含量均无影响,对MG63细胞具有良好的生物相容性。 3、载银纳米抗菌复合骨填充材料是具有一定的抗感染能力和成骨能力的骨填充材料,其抗感染能力较载万古霉素骨水泥稍弱,但成骨能力较载万古霉素骨水泥强,短期内在兔体内无明显毒副作用;在彻底病灶清除的前提下,能一期填充慢性骨髓炎术后骨缺损,有望成为治疗慢性骨髓炎的较为理想的骨填充材料。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 谭军;;可有效促进骨再生的人工合成骨填充材料面世[J];功能材料信息;2008年Z1期
2 卢旻鹏;蒋电明;权正学;李广州;曹何;刘明方;况尚如;李吉东;李玉宝;;载银纳米抗菌复合骨填充材料体外抗菌及缓释性能研究[J];中国修复重建外科杂志;2010年06期
3 ;美国研发新型骨填充材料[J];透析与人工器官;2010年01期
4 刘明方;邓一平;周莲娣;蒋电明;;载银纳米抗菌复合骨填充材料体外抗菌性能研究[J];中国微生态学杂志;2010年07期
5 殷其峰;汪益涵;黄青山;;载溶菌酶的羟基磷灰石/壳聚糖复合骨填充材料体外释放规律研究[J];生物技术世界;2013年08期
6 卢旻鹏;蒋电明;权正学;李广州;黄伟;欧云生;曹何;刘明方;况尚如;;载银纳米抗菌复合骨填充材料体外抗菌性能及生物相容性研究[J];中国矫形外科杂志;2010年06期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 蒋电明;况尚如;;载银纳米抗菌复合骨填充材料的制备及体外抗菌性能的初步研究[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 卢旻鹏;载银纳米抗菌复合骨填充材料治疗兔胫骨慢性骨髓炎的实验研究[D];重庆医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978