高效液相色谱—荧光检测法研究阿德福韦前药药代动力学及组织分布

【摘要】： 阿德福韦酯(adefovir dipivoxil,ADV)是新一代核苷类抗病毒药物,ADV在体内迅速代谢为活性物质阿德福韦(adefovir,PMEA),为PMEA的前体药物。体内外试验表明阿德福韦不仅对野生乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)有效,对拉米夫定耐药的HBV病毒株也有显著的抑制作用,现已广泛应用于慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)的抗病毒治疗。然而,动物和人体试验研究表明口服ADV具有潜在的剂量依赖肾脏毒性,其毒性作用和严重程度与剂量及用药时间呈正相关,一定程度上限制了其临床应用,因此,寻求新的ADV替代药物成为必要。 M1和M2是一类新合成的阿德福韦前体药物,其结构与ADV类似,为考察二者的早期药代动力学及组织分布,本研究选用beagle犬和wister大鼠为研究对象,以ADV作为参比药物,比较M1和M2与ADV的相对生物利用度。由于M1,M2在体内迅速代谢为活性物质PMEA,因此只需要通过测定PMEA的浓度,即可反映M1和M2在动物体内的血药浓度和组织分布变化情况。 本论文分别建立了高效液相色谱-荧光检测法测定了PMEA在beagle犬血浆及wister大鼠组织中的分布情况,并进行了系统的方法学考察。通过动物实验筛选并比较阿德福韦酯类前药M1和M2与ADV在beagle犬血浆及wister大鼠组织中的PMEA分布情况,为抗HBV新药的进一步开发提供一定的理论基础。 第一部分:建立PMEA在beagle犬血浆中的HPLC-荧光测定方法。研究ADV与M1,M2在beagle犬体内的药代动力学,比较M1,M2与ADV的相对生物利用度。以PMEA为测定药物,替诺福韦(tenofovir,PMPA)为内标,PMEA经柱前衍生化使之与氯乙醛反应生成高荧光物质1,N6-乙烯基腺嘌呤衍生物,建立了HPLC-荧光检测的测定方法,并进行了系统的方法学验证。药代动力学研究表明:灌服给药后的平均血浆药物浓度为ADVM1M2,相对生物利用度比较结果:以ADV的AUC值为标准计算后二者相对生物利用度F分别为56.79%,42.90%。 第二部分:建立PMEA在wister大鼠组织中HPLC-荧光测定方法。研究ADV与M1,M2在wister大鼠组织肝、肾内分布情况。以PMEA为测定药物,PMPA为内标,PMEA经柱前衍生化使之与氯乙醛反应生成高荧光物质1,N6-乙烯基腺嘌呤衍生物,建立了HPLC-荧光检测的测定方法,并进行了系统的方法学验证。组织分布研究表明:肝中M2M1ADV,肾中药物含量ADVM1M2,表明前药M2提高PMEA在肝中的分布,比M1,ADV具有更强的肝靶向性和更低肾毒性。