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肝癌细胞HepG_2间P-糖蛋白传递的研究

陈龙  
【摘要】: 目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcimoma,HCC)细胞HepG2间是否存在P-糖蛋白(P-glycoprotein ,P-gp)的传递及P-gp与多药耐药基因(multidrug resistance gene-1,mdr1)的关系。 方法:将pSUPER.neo+GFP质粒转染至HepG2细胞(命名为HepG2/GFP),并与阿霉素耐药HepG2细胞(命名为HepG2/ADM)混合培养。激光共聚焦显微镜观察肝癌细胞间P-gp的传递。免疫磁珠法分离混合培养细胞,收集原HepG2/GFP细胞(命名为HepG2/aqMDR),采用Western blot分析HepG2、HepG2/ADM、HepG2/GFP及HepG2/aqMDR细胞的P-gp表达水平,同时应用实时荧光定量PCR分析上述细胞mdr1 mRNA的表达水平。多样本均数比较用单因素方差分析,进一步两两比较用SNK-q检验。 结果:在荧光显微镜下,可见大量带绿色荧光的稳定克隆。激光共聚焦显微镜下见HepG2/aqMDR细胞以黄色荧光为主,而HepG2/GFP以绿色荧光为主,HepG2/ADM以红色荧光为主。Western blot检测结果显示HepG2/aqMDR细胞中P-gp表达水平低于HepG2/ADM,但明显高于HepG2/GFP(q=35.07,P0.05)与HepG2(q=36.87,P0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,HepG2/ADM细胞中mdr1 mRNA表达水平较高,而HepG2/aqMDR、HepG2、HepG2/GFP三组细胞中mdr1的mRNA表达水平差异没有统计学意义(F=2.30,P0.05)。 结论: P-gp可以从耐药肝癌细胞传递至敏感肝癌细胞,这一现象为进一步研究肝癌多药耐药机制提供了新的思路。


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