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麻黄水提物雾化吸入对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

王娇  
【摘要】:目的:研究麻黄水提物雾化吸入对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响,及白细胞介素-13(IL-13)、嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)在哮喘小鼠气道中的表达。探讨麻黄治疗哮喘的作用机制,为麻黄雾化吸入治疗哮喘提供实验资料和理论依据。方法:(1)麻黄加水浸泡30min后煎制1h浓缩,配成浓度相当于含生药1g/ml的水煎剂,贮存于4℃冰箱备用。(2)选取24只健康雌性BALB/c小鼠(5~6周龄),体重16~20g,随机分为3组:对照组(A组)、哮喘组(B组)、麻黄治疗组(C组),8只/组。除A组外,B、C组均建立支气管哮喘动物模型。第0、7d腹腔注射卵蛋白抗原液0.2 ml(含Al(OH)3lmg和卵蛋白100μg)致敏,第14d开始每天滴鼻吸入40μl2%卵蛋白生理盐水液进行激发,1次/d,连续7d。C组小鼠在每次滴鼻激发前1h予麻黄水煎液50ml雾化吸入30min,2次/d,连续9d。A组则用等量生理盐水代替抗原液进行腹腔注射致敏、激发和雾化吸入治疗,B组用等量生理盐水进行雾化吸入治疗。分别于建模第21d及23d腹腔麻醉行肺泡灌洗及留取肺组织标本。(3)计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和EOS总数;肺组织作病理切片HE染色,光学显微镜下观察支气管、支气管周围及肺组织的病理学改变;免疫组织化学染色(SP)法测定支气管肺组织中IL-13、Eotaxin蛋白表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺组织中IL-13、Eotaxin的蛋白浓度。实验数据采用均值±标准差(x±s)表示,用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析及直线相关分析。结果:(1)B组BALF中WBC、EOS数量明显增高(P0.05);与B组比较,C组中WBC、EOS数量明显减少(P0.05),但仍高于A组(P0.05)。(2)常规病理切片HE染色显示:A组气道上皮完整,支气管、细支气管管壁平滑肌层薄,管腔规则,无明显分泌物贮留,粘膜皱襞矮平,肺泡间隔正常,周围无明显炎症细胞浸润;B组气道上皮细胞增生肥大,上皮有脱落不完整,平滑肌增厚,支气管管腔有明显狭窄,管腔可见粘液栓,肺泡间隔增厚,支气管周围大量炎性细胞浸润;与B组比较,C组小鼠支气管管壁增厚及管腔狭窄均减轻,支气管周围及肺泡区炎症细胞浸润明显减少,肺泡间隔明显变薄,肺泡腔变大。(3)免疫组织化学染色法检测显示:与A组比较,B组支气管上皮细胞及间质细胞阳性表达细胞多,着色深,差异有统计学意义(P0.05);C组阳性表达细胞较B组少,着色较浅,差异有统计学意义(P0.05)。(4)ELISA结果显示:B组支气管肺组织IL-13、Eotaxin浓度明显高于A组、C组,差异有统计学意义(P0.05);与B组比较,C组小鼠IL-13、Eotaxin蛋白浓度明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。(5)各相关关系分析:IL-13蛋白表达与BALF中EOS计数:B组均明显增加(r=0.746,P0.05),C组均明显减少(r=0.729,P0.05)。Eotaxin蛋白表达与BALF中EOS计数:B组均明显升高(r=0.712,P0.05),C组均明显降低(r=0.734,P0.05)。IL-13蛋白表达与Eotaxin蛋白表达关系:B组IL-13及Eotaxin蛋白浓度皆明显升高(r=0.803,P0.05),C组IL-13及Eotaxin蛋白浓度皆明显降低(r=0.761,P0.05)。结论:(1)哮喘小鼠支气管肺组织中存在IL-13、Eotaxin蛋白表达上调。(2)麻黄水提物雾化吸入能抑制哮喘小鼠气道炎症。(3)麻黄抑制哮喘小鼠气道中IL-13、Eotaxin蛋白的表达可能是其抗炎机制之一。


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