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尼美舒利对喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠成瘤的影响及机制研究

梁灼萍  
【摘要】: 目的:尽管包括手术、放疗、化疗在内的各种方法都在不断改进,但喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)患者的五年生存率仍较低,它严重威胁着人民的生命和健康;并且近年来喉鳞癌的发病率不但没有降低,反而有上升且发病年轻化的趋势,因而寻找积极有效的预防途径和治疗药物成为一项十分迫切的重要任务。本实验通过研究选择性环氧化酶-2(cyclooxyge-nase-2,COX-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide, NIM)对喉鳞癌Hep-2细胞裸裸鼠成瘤以及COX-2、生存素(Survivin)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)表达的影响,以探讨NIM抗肿瘤的作用和可能的机制,从而为NIM用于喉鳞癌的预防和治疗提供试验依据。方法:对喉鳞癌Hep-2细胞进行传代培养,制成细胞悬液,接种于Balb/c-nu/nu裸鼠右侧背部皮下,建立移植瘤模型,12只荷瘤裸鼠随机分为实验组(即NIM治疗组,腹腔注射NIM50mg/kg/2d,0.2ml)和对照组(腹腔注射生理盐水,0.2ml),观察裸鼠生长情况,定期(每两天)称量裸鼠体重并以游标卡尺(每两天)测量移植瘤的最长径及最短径,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积=肿瘤最长径×肿瘤最短径2/2。用药4周后,处死裸鼠,取瘤体,常规HE染色观察移植瘤光镜下改变,并取裸鼠主要内脏行HE染色,观察NIM对裸鼠可能的毒副作用。利用免疫组织化学技术检测COX-2、Survivin和PCNA蛋白表达,显微镜下观察移植瘤细胞中COX-2、Survivin和PCNA蛋白表达情况,并采用图像分析系统作平均光密度值测定。同时采用逆转录-聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测COX-2、Survivin和PCNA mRNA表达,Biod-rad软件分析对照组与试验组COX-2、Survivin和PCNA mRNA灰度值。结果:(1)成功构建出人喉鳞癌裸鼠移植瘤模型,两组裸鼠均有喉鳞癌原位移植瘤生长,成瘤率100%;其瘤组织经病理切片检查证实为喉鳞癌,且在实验期内,2组动物全部存活。(2)2组裸鼠饮食正常,活动自如,精神状态良好,无1只死亡;其心、肝、脾、肺、肾的重量和组织形态观察无明显差异,解剖消化道,未发现出血病灶。(3)NIM治疗组裸鼠移植瘤体积为(172.67±115.25)mm3,较对照组(478.69±341.84)mm3明显减小,两组间差异有统计学意义(P0.05);NIM治疗组裸鼠体重为(23.22±1.78)g,对照组为(24.05±1.79)g,两组间差异无统计学意义(P0.05);NIM治疗组裸鼠移植瘤重量(0.40±0.33)g,较对照组(0.83±0.27)g明显减小,两组间差异有统计学意义(P0.05),计算抑瘤率为51.81%。(4)免疫组织化学SP法检测裸鼠移植瘤组织中COX-2、Survivin、PCNA蛋白表达,NIM治疗组COX-2蛋白表达光密度为(38.12±15.56),与对照组(140.92±23.12)比较显著下降,经统计学分析差异有统计学意义(P0.05);NIM治疗组Survivin蛋白表达为(46.79±10.04),经统计学分析与对照组(133.41±20.01)比较差异有统计学意义(P0.05);NIM治疗组PCNA蛋白表达显著下降(62.97±13.83),经统计学分析与对照组(110.23±13.00)比较差异有统计学意义(P0.05)。(5) RT-PCR检测COX-2 mRNA表达NIM治疗组灰度值为、(0.70±0.18),对照组为(2.23±0.38),经统计学分析差异有统计学意义(P0.05);NIM治疗组Survivin mRNA表达为(0.34±0.04),对照组为(1.85±0.18),经统计学分析差异有统计学意义(P0.05);NIM治疗组PCNA mRNA表达为(0.45±0.05),对照组为(1.91±0.70),经统计学分析差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)选择性COX-2抑制剂NIM对喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用。(2)NIM可抑制COX-2蛋白及mRNA表达,推测NIM可通过依赖COX-2表达的方式抑制肿瘤生长。(3)NIM可在蛋白及mRNA水平抑制喉鳞癌细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与抑制COX-2、Survivin及PCNA表达有关。(4)NIM无明显毒副作用。(5)选择性COX-2抑制剂有望成为未来喉鳞癌综合治疗的一部分,它的研制开发可能为喉鳞癌预防和治疗提供全新的广阔前景。


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