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土炒白术健脾止泻作用增强的机理研究

陈鸿平  
【摘要】:土炒是一种加辅料炒的常用炮制方法,历史悠久,始于晋、唐时期,其后历代均有记载,传统认为土炒可增强药物健脾止泻的作用或降低刺激性,目前常用的土炒饮片有白术、山药、当归等20余种,在临床广泛使用。关于土炒炮制的原理,从已有的文献检索来看,研究多以某单味中药炮制前后化学成分的含量变化为主,尚不能提供足够的科学依据来揭示其内涵,尤其是忽略了辅料在炮制过程中引起药物药效、毒性变化的实质意义,其科学内涵亟待阐明。 白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎,具有补气健脾,燥湿利水,止汗,安胎的功效,《本草真经》中谓“白术为脾脏第一要药也”,为土炒代表药物之一,传统理论认为白术土炒后健脾止泻作用增强,从古至今一直在临床上广泛使用,但关于白术土炒的炮制机理研究目前还未见文献报道。本课题以白术为研究对象,基于土炒传统要求须在药物表面挂土,作汤剂使用时土可与饮片煎剂一同进入体内的特点,提出研究假说:土除了可对炮制药物成分及溶出产生影响外,也可在体内产生作用,从而达到增效的目的。围绕上述假说,采用对比研究的方法,以揭示土在白术炮制前后药效变化中所起的实质作用为关键问题,通过土炒白术与生白术、清炒白术、炒灶心土之间药效,化学成分含量、组成、溶出及其在体内吸收、分布、代谢三方面的比较,首次从体内和体外两方面、多环节对土炒炮制的科学原理进行系统研究,阐明土炒炮制科学性。主要研究内容如下: 1.文献研究 通过查阅大量的古典医籍对土炒的历史沿革,辅料研究现状等进行了系统研究;对白术炮制历史沿革、炮制规范、炮制工艺、炮制原理等研究现状进行了系统的分析和整理;对近10年来关于白术的药材来源、化学成分及药理作用进展进行了系统回顾。通过文献研究,一方面对研究白术土炒的炮制机理奠定了理论基础,也为本课题研究找到了切入点,对研究方案的制定和顺利实施提供了有益的借鉴。 2.实验研究 2.1土炒增强白术健脾止泻作用的药效学实验研究 根据土炒白术健脾止泻增强,多用脾虚泄泻的传统理论,本文选择符合中医证候特点的脾虚泄泻动物模型,采用对脾虚动物腹泻指数的影响,对胃肠运动的影响,对胃肠激素的影响实验,首次对土炒白术健脾止泻作用进行了系统研究。研究结果表明,土炒白术能明显减少番泻叶致脾虚腹泻小鼠稀便率;调节脾虚腹泻小鼠胃肠运动的紊乱;显著升高脾虚小鼠血清胃动素、胃泌素水平;在减少脾虚腹泻小鼠稀便率、抑制脾虚腹泻小鼠胃排空加快指标上,其作用强度与生品(P0.01)、清炒品(P0.05)相比有显著差异,证实白术土炒后其健脾止泻作用确实明显增强,这与传统中医药炮制理论相吻合。研究结果还表明白术多糖具有与土炒白术水煎液一致的药效作用,提示白术多糖是白术健脾止泻的一类主要有效成分。研究证实灶心土也能显著减少番泻叶致脾虚腹泻小鼠稀便率,表明辅料本身即有一定的止泻作用。 2.2土炒炮制前后白术化学成分比较研究 中药经过炮制后,化学成分的组成和含量产生的不同程度改变,可能是其药理作用、临床疗效发生相应变化的主要原因之一。因此本研究为了探讨土炒后白术健脾止泻作用增强的原理,采用现代分析技术,首次对土炒炮制前后,白术挥发油、内酯类、多糖等主要化学成分在含量及组成上的变化进行了系统研究,为土炒炮制机理的科学阐释提供依据。 2.2.1挥发油类成分的测定比较采用水蒸气蒸馏法提取白术生品、清炒品、土炒品中挥发油成分,测定总挥发油含量,结果生品挥发油含量为0.79%,清炒品含量为1.24%,土炒品含量为0.59%,表明白术经土炒炮制后挥发油含量有所降低,但清炒后含量却增高。采用GC-MS方法对三种挥发油成分进行分析比较,结果表明三者在成分组成上无差异,与文献报道一致,但土炒品与生品、清炒品相比在主要成分相对含量上有显著差异:土炒品苍术酮、香叶烯B明显降低,Y-榄香烯、棕榈酸、亚油酸等成分明显升高。 2.2.2白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量比较采用HPLC法测定各批次白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量,结果表明白术经炒制后白术内酯Ⅱ含量不变,白术内酯Ⅰ、Ⅲ含量显著升高,清炒和土炒对白术内酯类成分含量影响无显著差异,表明白术炮制过程中内酯类成分的转化主要由炒制加热引起,辅料土对内酯类成分变化无实质作用。 2.2.3多糖含量及组成比较采用硫酸苯酚法测定各批次白术中多糖的含量,采用HPLC柱前衍生法分析白术多糖的单糖组成,结果表明:白术经炒制后白术多糖含量显著升高,而清炒和土炒对白术多糖含量影响无显著差异;多糖组成分析表明,白术炒制前后多糖成分均由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖组成,葡萄糖百分含量最高,但各单糖摩尔比无显著性差异。表明白术炮制过程中多糖含量增加主要由炒制引起,辅料土无实质作用。 2.2.4指纹图谱比较研究本研究分别建立了白术不同极性部位——正己烷和甲醇提取部位指纹图谱。结果表明不论是正己烷提取部位还是甲醇提取部位,土炒品、清炒品对照指纹图谱与生品指纹图谱相似度均0.9,清炒品对照指纹图谱与土炒品对照指纹图谱相似度均0.9。通过对HPLC指纹图谱进一步比较分析后发现,白术在炒制前后主要为色谱峰峰面积的改变,而共有色谱峰的峰数目基本未发生变化,说明白术在炒制后,其化学成分仅仅在含量上产生一定的变化,但清炒和土炒对其影响无显著性差异。 从测定结果可以看出,土炒对白术挥发油、内酯类及多糖类成分的含量均有影响,但通过与清炒组的对比首次明确,土炒对白术化学成分的影响主要是加热炒制引起的,辅料土在白术挥发油成分变化中起实质作用。 2.3辅料土对白术化学成分吸附作用研究 辅料在炮制过程中除了可使药物成分发生变化外,也可对药物成分产生定的吸附作用,从而影响药效。本研究首次以辅料灶心土为研究对象,运用TLC、HPLC方法对其炒制前后的化学成分进行了分析比较。结果表明,在土炒过程中白术多个挥发油成分被土吸附。 2.4土炒炮制前后白术主要化学成分煎出率的比较研究 中药传统主要以汤剂形式入药,中药经过炮制,除对其固有成分含量及组成有影响外,其化学成分的溶出也可能会发生改变,从而影响药效。本研究首次对白术水煎液制备工艺进行了优选研究,并对白术各炮制品标准水煎液中总糖、白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量及煎出率进行了比较,结果土炒后白术醇浸出物含量、总糖含量、白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ总含量均明显增高,与生品相比有极显著差异(P0.01);在醇浸出物、总糖含量指标上,土炒品明显高于清炒品(P0.05);表明与辅料土共同加热炮制后更有利于白术化学成分溶出。 2.5土炒炮制前后白术内酯Ⅲ药动学比较研究 白术饮片经土炒炮制后,一部分土会附着在饮片表面,与饮片水煎液一同进入机体,除直接发挥作用外,也可能影响药物成分的吸收、分布、代谢等从而影响药效。本研究首次采用血药浓度法对白术土炒前后水煎液中活性成分白术内酯Ⅲ在大鼠体内的吸收代谢情况进行了初步比较研究,对各给药组药时曲线下面积(AUC)、最大血药浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)等参数进行了统计比较。结果表明白术内酯Ⅲ为一级吸收的二室模型,在土炒水煎液中其AUC、Cmax有增大趋势,但与生品、清炒品、单体给药组相比无显著差异(P0.05);Tmax明显延迟,与其他给药组相比有显著差异(P0.05)。研究结果提示辅料进入机体后可对有效成分的吸收代谢等产生影响。


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