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白术内酯Ⅰ对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞存活素survivin表达的拮抗作用及促凋亡作用

林青  
【摘要】:目的:研究白术内酯I对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞存活素survivin表达的拮抗作用及其促凋亡作用。 方法:半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定不同浓度的LPS、紫杉醇、白术内酯I单独及白术内酯I联合紫杉醇诱导人卵巢癌SKOV-3细胞(TLR-4/MyD88+)和A2780细胞(TLR-4/MyD88-) 24小时后,survivin mRNA的表达情况;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染色法检测不同浓度的紫杉醇单独及与白术内酯I联合作用于上述两种人卵巢癌细胞24小时后,肿瘤细胞早期凋亡情况。 结果:RT-PCR结果提示:①TLR-4/MyD88+表达的人卵巢癌SKOV-3细胞及TLR-4/MyD88-表达的A2780细胞自身均可转录survivin mRNA。②用已证实的TLR-4的配体LPS梯度诱导TLR-4/MyD88+表达的SKOV-3细胞后,其survivin mRNA表达呈浓度依赖性增高,与空白对照细胞相比增加约0.3-1倍(p0.05),而TLR-4/MyD88-表达的A2780细胞上survivin基因无明显变化(p0.05)。③用紫杉醇诱导后MyD88+表达的SKOV-3细胞survivin mRNA表达呈浓度依赖性增高,与对照细胞相比增加约0.16~0.7倍(p0.05),而TLR-4/MyD88-表达的A2780细胞变化不明显(p0.05)。④用白术内酯I诱导SKOV-3及A2780细胞后survivin mRNA表达与空白对照细胞相比均无显著性差异(p0.05)。⑤用白术内酯I联合固定浓度紫杉醇诱导两种细胞后,MyD88+的SKOV-3细胞survivin mRNA表达呈浓度依赖性下降,与对照细胞相比下降约0.13~0.39倍(p0.05),而MyD88-表达的A2780细胞变化不明显(p0.05)。凋亡检测提示:对于MyD88+表达的SKOV-3细胞,白术内酯I联合紫杉醇诱导与紫杉醇单独诱导相比细胞早期凋亡率呈浓度依赖性增加(早期凋亡率分别为9.9±0.82、11.6±1.76;p=0.002、0.001),而MyD88-表达的A2780细胞凋亡无明显变化(p=0.336、0.593)。 结论:MyD88+表达的人卵巢癌SKOV-3细胞上存在着能够调控肿瘤细胞凋亡的紫杉醇—TLR-4/MyD88+—survivin途径,该途径可被LPS或紫杉醇激活,引起凋亡抑制蛋白survivin过表达,一定程度上抑制肿瘤细胞凋亡。白术内酯I能够拮抗上述抗凋亡途径,降低survivin的表达,促进肿瘤细胞凋亡。上述现象在MyD88-表达的人卵巢癌A2780细胞上没有出现。


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