何首乌、骨碎补和淫羊藿抗骨质疏松的作用机理研究

【摘要】：目的：观察抗骨质疏松中药何首乌、骨碎补和淫羊藿三种中药浸膏及其主要单体化合物的植物雌激素作用；观察淫羊藿主要成分淫羊藿苷通过芳香化酶促进雌激素合成的作用,从雌激素的角度来探讨其抗骨质疏松的作用机制。为这三种抗骨质疏松中药在临床上的应用提供理论基础。 方法：采用脂质体瞬时转染的方法,利用转染雌激素受体(estrogen receptor α/β,ERα/β)表达质粒的HeLa细胞,观察何首乌、骨碎补和淫羊藿三种中药浸膏及其主要单体化合物对雌激素反应元件(estrogen response element, ERE)报告基因的转录激活作用,考察其植物雌激素作用。运用磁徽粒雌二醇ELISA方法来检测淫羊藿苷处理过人卵巢颗粒细胞KGN细胞和大鼠成骨细胞UMR-106细胞培养液中雌二醇的含量；用qRT-PCR方法来考察淫羊藿苷在转录水平上对芳香化酶mRNA的影响；用Western blotting方法来考察淫羊藿苷在翻译水平上对芳香化酶蛋白的影响；检测碱性磷酸酶(ALP)活性来考察淫羊藿苷对UMR-106细胞的分化作用。 结果：不同浓度的何首乌、骨碎补和淫羊藿中药浸膏均能不同程度地诱导ERE报告基因的转录激活,何首乌中的主要活性成分大黄素(10μM)、骨碎补中的主要活性成分柚皮苷(50μM)和淫羊藿中的主要活性成分淫羊藿苷(50μM)均能显著诱导ERE报告基因的转录激活产生植物雌激素作用；50μM淫羊藿苷处理的KGN细胞和UMR-106细胞中雌二醇含量显著性增加,50μM淫羊藿苷促进芳香化酶mRNA的表达和促进芳香化酶蛋白的表达；淫羊藿苷促进UMR-106细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性增强。 结论：何首乌、骨碎补和淫羊藿这三种中药中具有雌激素作用,并且它们的激活强弱顺序大体上为：淫羊藿骨碎补何首乌；何首乌中的主要活性成分大黄素、骨碎补中的主要活性成分柚皮苷和淫羊藿中的主要活性成分淫羊藿苷产生植物雌激素作用,且都对ERβ的作用更强。淫羊藿苷通过促进KGN细胞中芳香化酶mRNA和蛋白质的表达,从而增加KGN细胞的雌激素合成。淫羊藿苷通过促进UMR-106细胞的雌激素合成从而促进成骨细胞的分化。