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感毒清颗粒对免疫功能影响的实验和临床研究

杨雯轩  
【摘要】:第一部分感毒清颗粒对环磷酰胺所致免疫抑制小鼠免疫功能影响的实验研究 目的:为了探讨感毒清颗粒对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,本研究通过建立免疫抑制小鼠模型,观察感毒清颗粒对免疫抑制小鼠免疫器官脏器指数和免疫细胞、免疫分子含量等方面的影响,并进行作用机制研究,为其临床应用提供理论依据。 方法:1.SPF级昆明种小鼠60只,体重18/22g,随机分为六组,分别为:正常对照组(生理盐水灌胃0.2mL/10g,连续7天);环磷酰胺模型组(生理盐水灌胃0.2mL/10g,连续7天,同时连续3天腹腔注射环磷酰胺50mg/kg);阳性对照组(连续3天腹腔注射环磷酰胺50mg/kg造模后,每天灌胃玉屏风颗粒混悬液2.25g/kg,连续7天);感毒清颗粒高、中、低剂量组(连续3天腹腔注射环磷酰胺50mg/kg造模后,每天分别灌胃感毒清颗粒8. lg/kg,4.05g/kg,2.025g/kg,连续7天),建立免疫功能低下小鼠模型。末次给药后小鼠禁食12h,摘除眼球采血,采用流式细胞术检测血液中NKT细胞百分比含量。 2.造模及给药方法同1,眼球采血后,处死小鼠,分别取胸腺、脾脏称重,计算胸腺、脾脏指数。将胸腺制成组织匀浆,离心,取上清,进行IFN-γ、IL-2、IL-4检测。 3.造模及给药方法同1,小鼠处死后,取脾,立即置液氮中,随后转移置-80℃低温冰箱保存,采用免疫组织化染色法检测脾脏T-Bet、GATA-3蛋白表达。 结果:1.与正常对照组相比,环磷酰胺模型组胸腺指数、脾脏指数显著降低(P0.05),给药后,感毒清颗粒各剂量组、玉屏风阳性对照组、模型组之间比较,无显著性差异(P0.05)。 2.与正常对照组相比,环磷酰胺模型组NKT数量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);给药后,感毒清颗粒高剂量组外周血NKT细胞数量明显高于环磷酰胺模型组,差异有统计学意义(P0.05)。感毒清颗粒中剂量组、玉屏风阳性对照组外周血NKT细胞数量亦有所提高,但与环磷酰胺模型组比较,无显著性差异(P0.05) 3.与正常对照组相比,环磷酰胺模型组1FN-γ、1L-2数量明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);给药后,感毒清颗粒高、中、低剂量组胸腺组织匀浆液IFN-γ表达明显高于环磷酰胺模型组,有显著性差异(P0.05);玉屏风阳性对照组胸腺组织匀浆液IFN-γ表达与环磷酰胺模型组比较,无显著性差异(P0.05)。 给药后,感毒清颗粒高剂量组胸腺组织匀浆液IL-2表达明显高于环磷酰胺模型组,差异有统计学意义(P0.05)。感毒清颗粒中、低剂量组、玉屏风阳性对照组胸腺组织匀浆液IL-2表达与环磷酰胺模型组相比,差异无统计学意义(P0.05)。 与正常对照组相比,环磷酰胺模型组IL-4表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);给药后,感毒清颗粒高、中剂量组、玉屏风阳性对照组胸腺组织匀浆液IL-4表达明显低于环磷酰胺模型组,有显著性差异(P0.05);感毒清颗粒高、中剂量组胸腺组织匀浆液IL-4表达与玉屏风阳性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。 4.与正常对照组相比,环磷酰胺模型组脾脏T-bet表达明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);给药后,感毒清颗粒高、中剂量组、玉屏风阳性对照组脾脏T-bet表达明显高于环磷酰胺模型组,有显著性差异(P0.05),说明感毒清颗粒、玉屏风颗粒可以提高免疫抑制小鼠脾脏组织T-bet的表达。感毒清颗粒高剂量组脾脏组织T-bet表达与玉屏风阳性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05),说明感毒清颗粒提高免疫抑制小鼠脾脏组织T-bet表达的作用与玉屏风颗粒相当。 与正常对照组相比,环磷酰胺模型组脾脏GATA-3表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);给药后,感毒清颗粒高、中、低剂量组、玉屏风阳性对照组脾脏GATA-3表达明显低于环磷酰胺模型组,有显著性差异(P0.05),说明感毒清颗粒、玉屏风颗粒可以降低免疫抑制小鼠脾脏组织GATA-3的表达。感毒清颗粒高剂量组脾脏组织GATA-3表达与玉屏风阳性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05),说明感毒清颗粒降低免疫抑制小鼠脾脏组织GATA-3表达的作用与玉屏风颗粒相当。 5.感毒清颗粒的上述作用皆呈现一定的量效依赖关系,高、中剂量组作用优于低剂量组。 结论:1.采用免疫抑制剂环磷酰胺制造免疫抑制小鼠模型,造模后小鼠胸腺指数、脾脏指数下降,说明使用环磷酰胺造模成功。 2.感毒清颗粒可以提高免疫抑制小鼠外周血NKT细胞数量,通过影响外周血NKT细胞数量,使机体的固有免疫向正常方向恢复。 3.感毒清颗粒可以提高免疫抑制小鼠胸腺组织IFN-γ、IL-2含量,降低IL-4含量,平衡TH1/TH2亚群细胞因子的比例,调节免疫细胞含量,其效果与玉屏风颗粒相当。 4.感毒清颗粒调节TH1/TH2亚群细胞因子比例的作用,可能部分源于对TH1/TH2亚群主要转录因子T-bet和GATA-3表达的影响,其效果与玉屏风颗粒相当。 第二部分感毒清颗粒治疗急性上呼吸道感染(气虚邪犯证)的临床观察及对患者免疫功能影响的临床研究 目的:通过临床观察,分析感毒清颗粒治疗急性上呼吸道感染(气虚邪犯证)的临床疗效及其对患者外周血T细胞亚群、B细胞、NK细胞含量的影响。论证感毒清颗粒治疗急性上呼吸道感染气虚邪犯证的可行性和有效性,为临床用药提供依据,为开发新型治疗急性上呼吸道感染制剂奠定基础。 方法:将2012年12月至2013年3月期间,就诊于成都中医药大学附属医院、成都市西安路羊西线社区卫生服务站的急性上呼吸道感染患者39例纳入研究范围,随机分为治疗组26例,对照组13例。治疗组给予感毒清颗粒,对照组给予抗病毒颗粒,进行疗程为3天的临床观察。从治疗组随机选取11例,对照组随机选取11例,采用流式细胞术分别检测两组患者治疗前后全血中T细胞亚群、B细胞、NK细胞百分比含量,并进行比较。 结果:1、治疗组和对照组疗效比较,愈显率比较有显著性差异(P0.05)。感毒清治疗组愈显率为87.5%,总有效率为100%;抗病毒对照组愈显率为27.3%,总有效率为100%;治疗组愈显率明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。 2、两组治疗后主症发热、咽痛、倦怠乏力、气短懒言均有明显缓解。感毒清组各主症治疗前后比较均有显著性差异(P0.05);抗病毒组发热、咽痛治疗前后比较有显著性差异(P0.05),倦怠乏力、气短懒言治疗前后比较无显著性差异(P0.05)。感毒清颗粒缓解主症发热、咽痛、倦怠乏力、气短懒言的疗效优于抗病毒颗粒。 3、两组治疗后次要症状恶风寒、汗出不畅、头痛、鼻塞、流涕、咳嗽治疗3天后也有缓解。感毒清组治疗前后各次要症状比较有显著性差异(P0.05);抗病毒组汗出不畅、头痛、鼻塞、咳嗽治疗前后比较有显著性差异(P0.05),恶风寒、流涕治疗前后比较无显著性差异(P0.05)。感毒清颗粒缓解次要症状恶风寒、汗出不畅、头痛、鼻塞、流涕、咳嗽的疗效优于抗病毒颗粒。 4、治疗后,感毒清组全血中T细胞亚群、B细胞、NK细胞百分比含量较治疗前均有明显的上升趋势,其中CD4/CD8的比值治疗前后比较有显著性差异(P0.05);抗病毒组全血中T细胞亚群治疗前后未有明显的变化,B细胞、NK细胞百分比有上升的趋势,但与治疗前比较均无显著性差异(P0.05)。两组组间全血中T细胞亚群、B细胞、NK细胞百分比含量水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。 结论:感毒清颗粒在改善急性上呼吸道感染主要症状发热、咽痛、倦怠乏力、气短懒言和次要症状恶风寒、汗出不畅、头痛、鼻塞、流涕、咳嗽等方面有显著的疗效,其作用优于抗病毒颗粒。感毒清颗粒能使上呼吸道感染患者的免疫细胞T细胞亚群、B细胞、NK细胞上调,调节免疫力。感毒清颗粒对急性上呼吸道感染(气虚邪犯证)有较好的治疗效果,对各种症状有明显的缓解作用,并可以提高上呼吸道感染患者的免疫功能。


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