美洲大蠊水提取物对小鼠烫伤模型的保护作用及TGF-β1/Smads机制研究

【摘要】：目的：基于美洲大蠊提取物具有促进组织修复作用的研究基础,筛选美洲大蠊抗烫伤作用有效部位,观察有效部位对小鼠烫伤模型的保护作用,探讨其抗烫伤作用的TGF-β1/Smads信号转导机制,进一步揭示美洲大蠊提取物的抗烫伤作用及物质基础。方法：(1)有效部位筛选研究：系统溶剂提取法制备美洲大蠊各部位药物,以小鼠烫伤模型为载体,通过测定创面愈合率、血清TGF-β1、IL-6含量,筛选美洲大蠊抗烫伤作用有效部位。(2)美洲大蠊水提取物抗烫伤作用的验证实验研究：取健康ICR雌性小鼠,按体重分层随机分为空白组、模型组、康复新液组、美洲大蠊水提取物低(0.327 g/kg)、中(0.490 g/kg)、高(0.653 g/kg)剂量组,采用82±2℃砝码烫伤小鼠背部脱毛区皮肤制备模型,观察药物外用5、10d对烫伤创面愈合率的影响,同时进行烫伤创面皮肤组织病理检查。(3)药物抗烫伤作用机制研究：①LISA法测定烫伤小鼠血清TGF-β1、IL-6含量,及皮肤组织bFGF、EGF含量,碱水解法测定烫伤小鼠皮肤组织羟脯氨酸含量,生化法测定血清SOD活力、MDA含量。②RT-PCR法测定药物对烫伤小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad2、 Smad3 mRNA表达水平的影响。③Western-Blot法测定药物对烫伤小鼠皮肤组织Smad2、Smad3蛋白表达水平的影响。结果：(1)与模型组相比,美洲大蠊水提取物能显著性提高小鼠烫伤后第5、10、15天创面愈合率,升高第5天小鼠血清TGF-β1含量,降低第10、15天血清TGF-β1水平(p0.05,p0.01)；石油醚部位、乙酸乙酯部位及氯仿部位显著性提高第10、15天创面愈合率；乙酸乙酯部位能降低第15天TGF-β1水平,氯仿部位、水萃部位及95%醇部位能显著性降低第10天血清TGF-β1、含量(p0.05)；石油醚部位、乙酸乙酯部位及95%醇部位升高第5天IL-6含量(p0.01),乙酸乙酯部位、氯仿部位能降低第15天IL-6含量(p0.05)。(2)与模型组比较,美洲大蠊水提取物各剂量用药5、10天均显著提高烫伤小鼠创面愈合率,并促进烫伤小鼠皮肤纤维母细胞、成纤维细胞及毛细血管等增生,亦能促进表皮、真皮及肌层损伤和真皮胶原纤维束排列紊乱的修复,尤以0.490 g/kg剂量的修复作用明显。(3)与模型组比较,美洲大蠊水提取物0.490 g/kg用药5d显著提高小鼠血清TGF-β1、SOD水平(p0.05,p0.01),降低烫伤小鼠血清MDA含量(p0.01),提高皮肤组织羟脯氨酸含量(p0.01)与EGF含量(p0.05),用药10 d则降低血清TGF-β1、IL-6含量(p0.05)；0.327g/kg剂量用药5d亦能提高血清SOD活性(p0.05),升高皮肤组织EGF、bFGF含量(p0.05),用药10 d则降低血清TGF-β1含量(p0.05)；0.653 g/kg剂量用药5d能提高烫伤小鼠血清SOD活力(p0.05)、皮肤组织EGF含量(p0.05)(4)与模型组比较,美洲大蠊水提取物0.490 g/kg、0.653 g/kg用药5d上调小鼠皮肤组织Smad2 mRNA表达水平(p0.05),0.490 g/kg剂量同时上调TGF-β1、 Smad3 mRNA表达水平(p0.05)；但0.490 g/kg、0.653 g/kg用药10 d则下调小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad2 mRNA表达水平(p0.05),0.327 g/kg剂量亦下调Smad2 mRNA表达水平(p0.01)。 (5)与模型组比较,0.653 g/kg剂量组用药5d能显著上调烫伤小鼠皮肤组织Smad2蛋白表达水平(p0.01),0.490g/kg剂量显著上调Smad3蛋白表达水平(p0.05)结论：美洲大蠊水提取部位为抗烫伤的有效部位,对烫伤小鼠有良好的保护作用,其抗烫伤作用表现为明显促进烫伤模型小鼠创面的愈合,促进损伤表皮、真皮等的修复。作用机制与增强模型小鼠血清SOD活性,提高皮肤组织羟脯氨酸、EGF、 bFGF水平,降低血清MDA和IL-6水平有关,即从抗氧化、增加胶原合成、促进生长因子释放、抑制炎症反应等途径发挥效应,作用发挥与调控TGF-β1/Smads(早期促进,后期抑制)信号转导通路有关,表现为既可促进修复但又避免瘢痕形成。