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“逆流挽舟”法干预溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜损伤的效应与作用机制研究

陈岚  
【摘要】:目的:本研究基于“逆流挽舟”法理论,探讨人参败毒散对溃疡性结肠炎大鼠细胞因子的含量、胃肠功能的影响及肠黏膜屏障紧密连接蛋白表达变化等肠黏膜损伤的部分作用机制,为“逆流挽舟”法及人参败毒散治疗溃疡性结肠炎提供实验依据。方法:采用TNBS诱导SD大鼠建立溃疡性结肠炎动物模型,分为空白组、模型组、阳性对照组和人参败毒散高、中、低剂量组;选用人参败毒散灌胃给予治疗,观察大鼠的一般状态;检测胃肠功能;HE染色观察结肠组织病理学变化;硫代巴比妥酸反应法测定MDA含量;黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性;比色法测定MPO活性;酶联免疫吸附法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量;实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹Western Blot法检测结肠组织紧密连接蛋白Occludin、Claudin-5、ZO-1mRNA表达和蛋白表达水平。结果:(1)一般状态及DAI评分:与模型组比较,阳性对照组、人参败毒散高、中、低剂量组SD大鼠精神状态、食量摄入、皮毛色泽度、大便粘液稀溏及脓血等表现均有明显改善。造模成功后给予治疗,与模型组比较,人参败毒散中剂量组和低剂量组大鼠的体重增加明显,具有统计学意义(P0.05)。DAI评分:模型组评分明显升高,阳性对照组、人参败毒散各剂量组评分均降低(P0.05)。(2)结肠组织损伤程度:肉眼观察:模型组大鼠结肠黏膜充血水肿,增厚变粗,长度变短,甚则肠粘连明显,糜烂,形成溃疡;阳性对照组和人参败毒散高、中、低剂量组大鼠结肠黏膜均有一定程度的修复,溃疡面积,结肠重量、长度均有所改善。CMDI评分:与模型组比较,阳性对照组和人参败毒散高、中、低剂量组结肠长度具有显著性差异(P0.05);阳性对照组和人参败毒散高、中、低剂量组结肠重量、结肠指数、溃疡面积和CMDI评分无显著性差异(P0.05)。HE染色显微镜下病理形态学观察:模型组结肠组织充血、水肿明显,结肠变短,肠壁增厚;黏膜及黏膜下层有炎性细胞浸润;黏膜受损脱落,可见糜烂和溃疡,大肠腺体结构破坏,淋巴细胞、浆细胞、单核细胞浸润可达肌层;阳性对照组、人参败毒散高、中、低剂量组结肠组织黏膜损伤有不同程度的改善,充血水肿减少,大肠腺体结构功能有一定修复,糜烂修复愈合、溃疡面积缩小,炎性细胞浸润减少;出现肉芽组织等。结肠黏膜组织损伤评分(TDI)显示:与模型组比较,阳性对照药组具有明显的改善(P0.05)。(3)胃肠动力:与模型组比较,人参败毒散高、中、低剂量组、阳性对照组胃残留率降低,有显著性差异(P0.05);阳性对照组和人参败毒散高、中、低剂量组小肠推进率升高(P0.05)。(4)血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量:模型组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量明显升高;与模型组比较,阳性对照组和人参败毒散高剂量组血清IL-1β和TNF-α含量降低(P0.05),阳性对照组和人参败毒散高剂量组血清IL-6和IFN-γ含量降低(P0.05)。(5)血清MDA、SOD、MPO含量:模型组MDA、MPO含量升高,SOD活性降低(P0.05);与模型组比较,阳性对照组、人参败毒散高、中、低剂量组MDA含量降低(P0.05),人参败毒散中剂量组SOD活性升高(P0.05),阳性对照组MPO含量降低(P0.05)。(6)结肠组织Occludin、Claudin-5、ZO-1mRNA表达:模型组结肠组织Occludin、Claudin-5、ZO-1mRNA表达降低(P0.05);与模型组比较,阳性对照组和人参败毒散高、中、低剂量组Occludin、Claudin-5和ZO-1 mRNA表达均升高,具有统计学差异(P0.05)。(7)结肠组织Occludin、Claudin-5、ZO-1蛋白表达水平:模型组结肠组织Occludin、Claudin-5、ZO-1蛋白表达水平明显降低(P0.05);与模型组比较,阳性对照组、人参败毒散高、中、低剂量组结肠组织Occludin蛋白表达水平显著升高,具有统计学意义(P0.05);阳性对照组Claudin-5蛋白表达水平显著升高,具有统计学意义(P0.05);阳性对照组、人参败毒散高、低剂量组ZO-1蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论:通过“逆流挽舟”法理论,运用人参败毒散干预治疗溃疡性结肠炎大鼠,对肠黏膜有较好的改善作用:可显著改善溃疡性结肠炎大鼠的一般状态表现和结肠组织炎症程度,促进胃肠动力功能的改善,抑制促炎性细胞因子的释放,改善机体免疫功能,降低氧自由基的含量,修复肠黏膜损伤,其机制对改善肠黏膜损伤的效应相关;调控肠黏膜紧密连接相关蛋白,上调蛋白表达以维持结构稳定性,降低肠黏膜的通透性,对肠黏膜机械屏障形成保护,可能是改善肠黏膜屏障的作用机制之一。


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