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基于《内经》“盐胜血”理论研究高盐对血压影响的分子机制

赵杨梅  
【摘要】:目的:基于《内经》“盐胜血”理论,在前期高盐饮食对血脉及血压影响的实验研究基础上,利用基因芯片高通量数据筛选的方法,检测高盐饮食对血压影响的基因表达谱,对其表达谱进行差异性分析,找出高盐对血压影响的关键基因及通路,从分子水平角度阐释“盐胜血”视角下高盐饮食致血压升高的机制。为低盐饮食配合活血化瘀药防治高盐饮食导致的高血压病提供一定的科学支撑,为选用特异性活血化瘀药防治高血压病提供一定的实验依据,拓展《内经》“盐胜血”理论在高血压病防治临床中的运用。方法:参照课题组前期所做的“盐胜血”动物实验,将24只(体重180g~220g,雌雄各半)健康3月龄Wistar大鼠按体重分级分组编号,随后按随机数目法分为正常对照组(以下简称为正常组)、高盐血压组(以下简称模型组),每组12只,雌雄各半。模型组按每100g体重给予灌胃12%Na Cl溶液1m L,正常组给予同体积蒸馏水1m L。每天上午灌胃1次,连续30天结束。实验期间正常组与模型组2组大鼠均给予普通饲料(含食盐0.3%),正常饮水,观察大鼠体重变化、血压变化情况等。模型组,在第30天灌胃测定血压后,与正常组一起,腹主动脉取全血,经过分离血浆,再加入红细胞裂解液,离心得到白细胞,进行RNA的提取,杂交,扫描。随后进行差异基因表达谱的分析筛选,采用GO、KCGG数据库进行功能性分析等,筛选出高盐饮食导致血压升高的关键通路和基因。为避免性别差异对实验研究造成影响,本次实验结果采用分性别统计对比分析法,即模型组雄性大鼠结果与正常组雄性大鼠结果比较,模型组雌性大鼠结果与正常组雌性大鼠结果比较,然后再汇总分析比较结果。结果:(1)高盐饮食对血压的影响与正常组比较,模型组大鼠血压在实验期间持续升高,其中第8天模型组雌性和雄性大鼠的收缩压分别为131.7±3.1mm Hg和130.7±5.6mm Hg;第15天分别为136.5±3.6mm Hg和139.7±5.4mm Hg;第22天分别为158.8±9.0mm Hg和160.0±10.1mm Hg;第30天分别为174.0±14.0mm Hg和172.0±8.8mm Hg。(2)高盐饮食对血压影响的基因表达谱变化(1)模型组与正常组之间基因表达呈现出差异性,模型组基因数据分析表明,与同性别正常组比较,模型组雌性差异变化有1688个(P0.05,|log2(fc)|1),模型组雄性差异变化有907个(P0.05,|log2(fc)|1),其中模型组雌性和雄性基因共同变化表达的有92个,表现为共同上升的81个,共同下降的4个,显著变化的基因有9个(P0.01,|log2(fc)|1),分别为kif17、Olr322、LOC103692343、Ndufa4l2、Pax8、pla2g1b、pla2g3、Prl3d4和RGD1566226。(2)KEGG分析显示,与同性别正常组比较,模型组雌性和雄性差异基因共同富集的通路有38条,其中P0.05的代谢通路有3条,分别为醚酯代谢通路(ko00565:Ether lipid metabolism)、花生四烯酸代谢通路(ko00590:Arachidonic acid metabolism)和α-亚麻酸代谢通路(ko00592:alphaLinolenic acid metabolism)。且基因pla2g3和pla2g1b共同在以上3个通路上富集。结论:(1)高盐饮食可致实验大鼠血压持续升高,血压升高的程度与高盐给予的时间长短呈正相关,高盐饮食导致血压升高的程度在性别上差异不明显。(2)模型组雌性大鼠和雄性大鼠基因表达变化存在差异,基因kif17、Olr322、LOC103692343、Ndufa4l2、Pax8、pla2g1b、pla2g3、Prl3d4和RGD1566226呈显著变化(P0.01,|log2(fc)|1)。(3)醚酯代谢通路(ko00565:Ether lipid metabolism)、花生四烯酸代谢通路(ko00590:Arachidonic acid metabolism)和α-亚麻酸代谢通路(ko00592:alpha-Linolenic acid metabolism)可能为高盐饮食导致血压升高的差异表达基因功能关键通路。(4)pla2g3和pla2g1b为高盐饮食导致血压升高的靶点基因。


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