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系统性红斑狼疮相关T细胞克隆的实验研究

任丽娅  
【摘要】: 目的:通过研究系统性红斑狼疮患者T细胞受体可变区β链互补决定区3(TCRVβCDR3)的表达,寻找与病证相关的T细胞克隆。 方法:收集系统性红斑狼疮患者12例,根据痰瘀辨证标准进行分类,设立正常对照6例和类风湿关节炎对照5例。每例抽取5ml外周血,运用RT—PCR技术,扩增TCRVβ25个家族的CDR3区,通过长泳道测序胶电泳观察TCRVβCDR3谱型图,分析T细胞表达特征;对发生优势克隆增生的异常条带进行二次PCR,测序,进行比对分析。 结果:1.正常人外周血TCRβ链的25个V基因家族均有表达,条带的强弱呈现正态的高斯(Gaussian)分布。2.系统性红斑狼疮患者与正常人群相比,发生异常变化的TCRVβ家族明显增多,具有统计学意义(P<0.05);而类风湿性关节炎患者与正常组相比,发生异常的家族虽较之有一定增多,但无统计学意义。3.痰瘀兼夹型系统性红斑狼疮组比正常人群异常TCRVβ家族数目明显增多(P<0.01),与非痰瘀兼夹型SLE组相比有统计学意义(P<0.01);而非痰瘀兼夹型系统性红斑狼疮患者其异常家族虽较之正常组增多,但与正常人群相比无意义。兼夹证型较之单一证型异常家族数目明显增多。4.编号为SLE5、SLE7、RA1的患者Vβ25CDR3区完全一致(CASSLRGSTEAFF),三者辨证均属于血瘀证;编号为SLE1和RA1的患者Vβ12CDR3区完全一致(CAISELREGDMSSGNTIYF),SLE1为痰瘀兼夹证,RA1为血瘀证;编号为SLE12、RA3的患者Vβ4CDR3区完全一致(CSVGGLAGETQYF),SLE12为痰瘀兼夹证,RA3为血瘀证;编号SLE9的患者与造血干细胞移植后GVHD和CMV相关的异常扩增的T淋巴细胞CDR3序列完全相同(CASSPGDEQFF),属于Vβ11家族,SLE9为非痰非瘀型缓解期患者。 结论1.TCRVβ谱系可作为系统性红斑狼疮一个微观辨证参考指标。2.不同自身免疫病有相同的序列,推测LREGDMS、LRGS、GGLAG、PGD是与自身免疫病发病相关的模体。3.同一证型可能存在着有相同序列的T细胞。CASSLRGSTEAFF、CAISELREGDMSSGNTIYF、CSVGGLAGETQYF可能与血瘀证具有一定的相关性,模体为LREGDMS、LRGS、GGLAG的T细胞可能是在自身免疫病中,与血瘀证发生相关的T细胞,其活化所介导的自身免疫反应可能使患者有表现为血瘀证的倾向。


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