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中西医结合治疗硬皮病模型小鼠的实验研究

巫婷婷  
【摘要】: 目的:建立硬皮病小鼠模型,研究中西医结合治疗对硬皮病模型小鼠的影响,并探讨转化生长因子(TGF-β)与结缔组织生长因子(CTGF)的相关性,为临床中西药联合治疗硬皮病提供理论依据。 方法:1.硬皮病小鼠模型的建立:将6周龄Balb/c小鼠随机分为模型组和对照组,模型组皮下注射400μg/ml的博莱霉素0.1ml,对照组皮下注射PBS 0.1 ml,每日1次,共28天。观察皮肤、肺组织的病理学改变;胶原纤维VG染色,并采用Image-proplus 5.0软件推算其积分光密度(IOD);免疫组织化学(IHC)SP法检测皮肤组织TGF-β的表达,并推算其IOD。根据上述指标的变化判断造模是否成功。 2.中西医结合治疗硬皮病模型小鼠:建立硬皮病小鼠模型后,将模型组分为模型对照组、西药组、中药组、中西药组,每组10只,灌胃给予不同剂量的药物,连续治疗30天。实验期间观察各组小鼠一般状况和皮肤的改善情况;观察皮肤、肺组织的病理学改变,应用Olympus图象系统测定皮肤厚度;胶原纤维VG染色,并推算其IOD;ELISA法检测血浆中CTGF的水平和皮肤组织中羟脯氨酸的含量,并用羟脯氨酸的含量来推断胶原含量的变化;IHC-SP法检测皮肤组织TGF-β的表达,推算IOD,并分析其与CTGF的相关性。 结果:1.模型组和对照组皮肤厚度分别为602.20±28.98μm、286.80±32.79μm;胶原纤维IOD值分别为24205.81±2045.99、11533.49±1651.55;TGF-β的IOD值分别为7892.33±255.98、3018.29±208.66,二者比较差异具有统计学意义。模型组肺组织较对照组肺泡间隔增厚,伴大量单核细胞浸润。 2.中西医结合治疗后,模型对照组和治疗各组(西药组、中药组、中西药组)皮肤厚度分别为618.33±31.25μm、459.33±34.25μm、484.66±42.98μm、423.22±37.26μm;胶原纤维IOD值分别为24746.41±2548.21、18545.98±1683.31、19317.37±1553.28、17317.02±1426.39;胶原含量分别为6905.62±241.16μg/ml、5135.29±302.52μg/ml、5461.36±395.54μg/ml、4970.29±338.96μg/ml:血浆中CTGF水平分别为564.44±56.31 pg/ml、416.11±63.77 pg/ml、427.78±53.33 pg/ml、361.67±41.68 pg/ml;皮肤组织中TGF-β的IOD值分别为7996.96±286.87、6161.27±399.62、6178.91±403.04、5632.01±331.62,治疗各组与模型对照组比较差异具有统计学意义。治疗各组肺组织病理结构较模型对照组无明显改善。皮肤组织TGF-β含量与血浆CTGF水平呈正相关。 结论:博莱霉素连续皮下注射可导致小鼠皮肤硬化,符合硬皮病皮肤基本的组织病理学改变,成功制作硬皮病动物模型。中西药组对硬皮病模型小鼠皮肤的厚度、胶原纤维的增生有明显的改善作用,疗效优于中药组和西药组,表明可通过抑制皮肤胶原纤维增生和降低胶原含量而抑制皮肤的纤维化,其作用机理可能与降低TGF-β、CTGF等致纤维化细胞因子的水平有关。


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