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多种外排泵抑制剂逆转鲍曼不动杆菌耐药性的研究

周云  
【摘要】:目的:了解川东北地区鲍曼不动杆菌临床分离株对22种常用抗菌药物的耐药情况;探讨外排泵基因分布与多重耐药的关系,检测多重耐药菌株和相对敏感菌株的外排功能;观察四种外排泵抑制剂(efflux pump inhibitors,EPIs)逆转鲍曼不动杆菌耐药的效果,为外排泵抑制剂的开发和多重耐药菌感染的治疗提供实验室数据。 方法:随机收集非重复鲍曼不动杆菌共116株,采用琼脂平皿二倍稀释法测定22种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测adeB基因的分布情况;将细菌分为adeB阳性组和adeB阴性组,以头孢唑啉﹑庆大霉素﹑诺氟沙星﹑氯霉素﹑四环素为外排底物,分别加入泵抑制剂利血平(40μg/ml)﹑维拉帕米(80μg/ml)﹑奥美拉唑(80μg/ml)﹑羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide-m-chlorophenylhydrazone,CCCP)(20μg/ml)后观察细菌耐药情况的变化;以罗丹明6G为示踪剂检测多重耐药株和相对敏感株的外排情况。 结果:鲍曼不动杆菌临床分离株的主要来源是痰液(72.4%),菌株主要分布于ICU(32.8%)﹑呼吸内科(16.4%)和烧伤科(10.3%)。22种抗菌药物中,对多粘菌素的敏感率达100%,对利福霉素的耐药率最高(97.4%),对氨苄西林﹑头孢唑啉、头孢西丁和氨曲南的耐药率均高于90%;对亚胺培南耐药率达到11.2%,而对美罗培南仅1.7%的耐药率;多重耐药菌有89株,比例达76.7%。有74株细菌检测到adeB基因,检出阳性率为63.8%;在adeB阳性菌中有多重耐药菌株72株,比例高达97.3%。庆大霉素加入CCCP后显示出外排阳性的菌株数量最多,有87株(75%),其次氯霉素加入利血平后显示出外排阳性的菌株有54株(46.6%);显示外排阳性菌株效果最好的分别为:CCCP+庆大霉素(75%),利血平+氯霉素(46.6%),奥美拉唑+氯霉素(33.6%),维拉帕米+庆大霉素(17.2%)。利血平﹑奥美拉唑和CCCP在adeB阳性菌株和阴性菌株中的外排阳性数据有统计学差异。多重耐药株和相对敏感株对罗丹明6G的外排量明显高于鲍曼不动杆菌标准菌株,多重耐药株的外排量明显高于相对敏感株。 结论: 1.川东北地区鲍曼不动杆菌临床分离株对多种常用的抗菌药物存在着耐药。 2.adeB基因在鲍曼不动杆菌中的检出率高于60%,其与多重耐药有密切关系。 3.药物的主动外排是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一,外排泵抑制剂利血平﹑维拉帕米﹑奥美拉唑﹑CCCP可以部分逆转鲍曼不动杆菌的耐药性,但各外排泵抑制剂对底物的特异性不同,以CCCP筛选外排阳性菌效果最佳。 4.以罗丹明6G作为外排示踪剂,在多重耐药株和相对敏感株的外排量有明显差异,外排量的多少与多重耐药密切相关。


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