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TWEAK慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达与功能初步研究

许媛  
【摘要】:目的:构建人肿瘤坏死因子样微弱凋亡诱导剂(TWEAK)慢病毒表达载体,转染人肝癌细胞株Hep G2细胞,研究该基因在Hep G2细胞中的表达以及对Hep G2细胞的生物学性状的影响。方法:以p ORF5-TWEAK为模板,普通PCR反应扩增TWEAK全长基因,通过酶切、连接等步骤构建Plentilox3.7-TWEAK重组质粒,利用293T包装细胞包装含TWEAK的慢病毒颗粒,以人肝癌细胞株Hep G2细胞为研究对象,将含TWEAK的慢病毒颗粒感染Hep G2细胞,分别采用q RT-PCR法、Western-blot法和流式细胞术等检测TWEAK、成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)和p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达变化,以及对细胞增殖活性、细胞周期、细胞凋亡、迁移的影响。结果:从质粒p ORF5-TWEAK中扩增到全长TWEAK基因,并插入慢病毒载体Plentilox3.7中,鉴定后的重组质粒经293T细胞包装后感染Hep G2细胞,成功过表达TWEAK。在Hep G2细胞中,TWEAK诱导Fn14表达增加(P0.05),但TWEAK/Fn14并不激活p38 MAPK信号通路(P0.05)。Plentilox3.7-TWEAK转染后Hep G2细胞的增殖活性、细胞周期、凋亡及迁移无明显变化(P0.05)。结论:成功构建了TWEAK重组慢病毒载体,初步表明在Hep G2细胞中,转染重组慢病毒载体后能有效表达目的蛋白TWEAK,并可诱导其受体Fn14表达上调,其具体生物学功能有待进一步研究。


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