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白藜芦醇稳定性及与T2毒素对HepG2细胞作用的研究

晋圣坤  
【摘要】:白藜芦醇存在于花生、葡萄、虎杖等植物中,具有抗氧化、消除白由基、抗细菌和抗真菌、保护心血管等作用。实验所用白藜芦醇为西南大学药学院提供。应用HPLC考察了白藜芦醇干粉在高温、高湿、强光照条件下0天、5天、10天的变化情况,同时设计了日光、温度、酸、碱、氧化剂、pH对白藜芦醇溶液稳定性的影响。结果表明,白藜芦醇干粉在高温、高湿条件下性质较为稳定,在强光照条件下性质不稳定。白藜芦醇溶液在日光照射下一小时,含量下降明显;60℃温度作用白藜芦醇溶液一小时,含量出现下降。白藜芦醇溶液对日光、温度均表现出不稳定性。酸、碱、氧化剂均对白藜芦醇溶液的稳定性存在破坏作用。当pH为4-7时,白藜芦醇溶液较稳定,当pH偏碱性时(pH=8、9)时,白藜芦醇溶液稳定性较差,随着作用时间延长,反式白藜芦醇可转化成顺式白藜芦醇。实验同时还用熔点仪测得白藜芦醇干粉熔点为248.8-250.4℃,3,4’,5-三乙酰白藜芦醇干粉熔点为112.8-114.3℃。 T2毒素为A类单端孢霉烯族毒素中毒性最强的一种化合物,存在于被污染的玉米、小麦等粮食作物中,对人畜健康有着较大的危害。为了初步研究T2毒素对细胞的毒性作用,实验以HepG2肝癌细胞为研究载体,设定不同终浓度的T2毒素作用不同时间(24h、48h)。MTT法检测发现随着T2毒素终浓度升高及作用时间延长,HepG2肝癌细胞存活率下降。当T2毒素与白藜芦醇及其乙酰化衍生物联合作用于HepG2肝癌细胞时,联合作用实验组细胞OD值要高于T2毒素组,这表明白藜芦醇及其乙酰化衍生物可在一定程度上保护HepG2肝癌细胞免受T2毒素侵袭,诱导细胞发生脂质过氧化是T2毒素毒性机制之一,而白藜芦醇及其乙酰化衍生物具有抗氧化能力。实验还通过倒置显微镜观察T2毒素对HepG2肝癌细胞形态的影响。正常HepG2肝癌细胞呈长梭形或多角形,细胞贴壁生长,细胞之间摆列紧密;当T2毒素作用HepG2肝癌细胞48h后,悬浮细胞增多,细胞有皱缩现象且细胞之间分离度增大。 采用硫代巴比妥酸(TBA)法和硫氰酸铁(FTC)法研究比较白藜芦醇及其乙酰化衍生物抑制油脂脂质过氧化能力。实验发现白藜芦醇及其乙酰化衍生物均可抑制油脂的氧化。同时用邻苯三酚自氧化法测定白藜芦醇及其乙酰化衍生物对超氧阴离子自由基的清除作用,白藜芦醇及其乙酰化衍生物都可清除超氧阴离子自由基,其中100μg/ml白藜芦醇单体的清除率为85.4%。


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