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高效液相色谱法在几种中草药中的应用研究

杨远高  
【摘要】:高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)是现代一种重要的新型分离分析技术,具有分离效能好、检测灵敏度高、分析速度快、适用范围广和操作简便等优点。它是采用高压输液系统将流动相送入色谱柱中,各成分在柱内被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。目前,该方法已广泛的应用于食品分析、环境监测、生物工程、制药工业等科学领域。 中国是中草药的发源地,中草药中的有效成分是预防治疗疾病的物质基础,.其含量的多少己成为评估中药质量的重要标志。近年来,随着生活水平的不断提高,使得人们“回归自然”的要求日趋强烈,国内外学者对中药中天然成分的研究提出了许多新方法新思路,现代的分析技术也在中药研究中得到广泛的应用。其中,高效液相色谱法(HPLC)是中药质量分析最重要的手段之一 样品前处理是色谱分析前的一个重要步骤,由于中药是一个典型的复杂未知样品,各成分的物理化学性质不同,含量相差大,因此,样品前处理技术的先进与否,往往是色谱分析成败的关键。 本文由绪论和研究报告两部分组成。绪论部分简单介绍了高效液相色谱法的特点和发展状况、酚类化合物和样品前处理技术的研究进展。研究报告部分建立了虎杖中白藜芦醇的提取测定;高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的分离测定;小儿泻速停颗粒中没食子酸、儿茶素、表儿茶素的分离测定; 1、胶束萃取-高效液相色谱法测定虎杖中的白藜芦醇 以5%(w/v)的非离子表面活性剂Triton X-100为萃取剂,建立了一种简便绿色的胶束提取-高效液相色谱测定虎杖中的白藜芦醇的方法。色谱柱为phenomenex C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.25%乙酸等度洗脱,流速0.8mL·min-1,,检测波长306nm。白藜芦醇在0.04~200μg/mL,(r=0.9998)范围内线性关系良好,定性检测限(S/N=3)为9.46ng/mL,加入6%的NaCl来进行浊点富集,可提高萃取回收率,加标回收率为94.47%。 2、超声提取-高效液相色谱法同时测定高良姜中的槲皮素、山奈酚、高良姜素 建立基于非离子表面活性剂超声提取-反相高效液相色谱法同时分离测定高良姜中槲皮素、山奈酚、高良姜素的方法。方法:采用phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.25%冰醋酸水溶液,采用梯度洗脱;流速1.0mL/min;检测波长360nm。通过正交实验确定最优提取方案为:在40℃下,100倍量的8%Triton X-100溶液超声提取40min。结果:槲皮素、山奈酚和高良姜素分别在0.0076~76μg/mL,(r=0.9999);0.0064~64μg,mL,(r=1.0000);0.0152~152μg/mL,(r=0.9999)范围内线性关系良好,定性检测限(S/N=3)依次为:7.32ng/mL,1.92ng/mL,1.13ng/mL:结论:该方法简便快速、灵敏度高、成本低、绿色环保,适用于高良姜中黄酮类物质的含量测定,为高良姜中黄酮化合物的的检测及分离提供了一个有效的科学方法。 3、胶束萃取-高效液相色谱法测定小儿泻速停颗粒中的多酚类化合物 建立了基于表面活性剂胶束萃取-反相高效液相色谱法同时分离测定小儿泻速停颗粒中没食子酸、儿茶素、表儿茶素的方法。方法:采用phenomene×C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-0.2%冰醋酸水溶液,采用梯度洗脱;流速0.8mL/mim检测波长280nm。考察了色谱条件,优化了胶束萃取和浊点富集参数。结果:没食子酸、儿茶素和表儿茶素分别在0.0104~223μg/mL,(r=0.9999);0.0152~108μg/mL,(r=0.9999);0.0184~132μg/mL,(r=0.9999)范围内线性关系良好,定性检测限(S/N)依次为:0.087ng/mL,0.43ng/mL,0.42ng/mL:在优化条件:5%Triton X-100表面活性剂;固液比为1:100(g/mL);在30℃超声萃取30min,萃取率可达到最大。加入5%NaCl来进行浊点富集,可提高萃取回收率。平均回收率为91.85%-98.48%结论:本法简便快速、灵敏度高、成本低、绿色环保,可用于该制剂的质量控制。


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