收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猕猴桃(Actinidia L.)荧光原位杂交技术体系的建立与优化

赵洋  
【摘要】:猕猴桃(Kiwifruit)属猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia Lindl.),雌雄异株,为多年生攀缘性落叶藤本果树,是20世纪人工驯化栽培野生果树最为成功的四大果树种之一。猕猴桃属植物种类繁多,分布范围广泛,生态习性各异,含有大量的野生资源及近缘物种,具有较为复杂的遗传多样性,且由于自然杂交、实生选种和杂交育种等因素,使种间和种内的基因渐渗频繁,从而形成了极为丰富的种间变型和种内变型,因此猕猴桃属植物遗传多样性以及种间与种内亲缘关系的深入研究具有明显的重要性与必要性。当前,国内外学者运用形态学、孢粉学、细胞学、生物化学和分子生物学技术等从不同层次、不同方面、不同角度对猕猴桃属及其近缘野生种植物进行了大量的遗传多样性与亲缘关系研究分析,取得了重要进展。荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization,FISH)作为分子细胞遗传学一项重要的研究手段,在动植物遗传图谱构建、遗传多样性与亲缘关系分析、基因定位、杂种鉴定等方面具有广泛的应用,但由于猕猴桃属植物染色体小(0.6~1.5μm)且数目多(2n=58,116,174等),FISH技术在猕猴桃属植物研究方面几乎属于空白。本文选用当前主栽品种“红阳”(2n=2x=58)以及通过“红阳”与野生种毛花猕猴桃(A.eriantha Benth.,2n=2x=58)有性杂交人工创制杂种后代为试验材料,基因组DNA与45S rDNA为探针,分别对基因组原位杂交(Genome in situ hybridization,GISH)、45S rDNA-FISH以及DNA纤维原位杂交(Fiber-FISH)技术体系进行研究,系统建立适于猕猴桃染色体研究的染色体与DNA纤维原位杂交技术体系,为猕猴桃属植物遗传多样性与亲缘关系分析以及遗传图谱构建、基因定位与杂种后代鉴定等提供重要的研究途径,主要研究结果如下:1、GISH技术体系建立与优化对GISH技术体系中关键影响因子包括染色体变性与封阻DNA浓度2个重要技术环节进行了条件优化。采用分别变性即探针与染色体DNA分别变性的方法;探针DNA变性采用常规变性即PCR仪97℃反应10 min即可,而染色体变性很关键,变性温度与时间不足,DNA双螺旋不能完全解开,温度过高或时间过长,均可能导致染色体上的DNA会损失严重或过度膨胀造成脱落,导致杂交目标丢失或减少,通过对变性条件的筛选,认为70-75℃变性2 min均适宜于猕猴桃GISH染色体变性。以“红阳?猕猴桃基因组DNA为探针、毛花猕猴桃基因组DNA为封阻,通过不同封阻比例的筛选,认为封阻DNA浓度为探针的50倍最适于猕猴桃GISH分析,可有效区分出不同基因组来源,杂交信号清晰,背景干净。2、45S rDNA-FISH技术体系建立与优化在筛选优化染色体变性等主要技术步骤基础上,以“红阳”猕猴桃幼嫩根系为研究材料,45S rDNA为探针,对猕猴桃45S rDNA-FISH技术体系进行优化,主要对杂交后洗脱强度进行了比较筛选,认为相比GISH分析时42℃洗脱,45S rDNA这样的小片段DNA探针杂交后洗脱温度以37℃洗脱效果更佳,适于猕猴桃FISH分析,可获得背景干净、信号明显的杂交结果。3、Fiber-FISH技术体系建立与优化利用“红阳”猕猴桃幼嫩根系为试验材料,对细胞核提取、DNA纤维制备以及Fiber-FISH技术体系中关键影响因子包括DNA纤维变性、杂交后洗脱与衬染条件等进行了研究,主要结果如下:(1)细胞核提取采用“刀切法”较“液氮研磨法”效果更好,前者简便无毒,细胞核完整、无破损,提取率100%,后者操作复杂、有毒,且杂质多,细胞核易破损不完整,得率相对较低;(2)DNA纤维制备时对裂解液温育时间进行了筛选,设置5个反应梯度即分别温育10、15、20、25、30 min,结果表明20 min效果最好,获得的DNA纤维质量最佳,呈现平直、均匀且密度较大;(3)Fiber-FISH技术体系中,DNA纤维变性温度与时间分别严格控制在68℃变性2 min,杂交后洗脱温度以37℃洗脱2次最佳,另外,DNA纤维衬染时,DAPI浓度选择5μg/m L,染色时间为20 min效果最好。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 宋文瑛;;Effect of Actinidia chinensis planch polysaccharide on the growth and apoptosis,and p-p38 expression in human gastric cancer SGC-7901 cells[J];China Medical Abstracts(Internal Medicine);2014年02期
2 Yu Zhijun;Liu Jianjun;Song Li;Hu Zongwen;;Preliminary Study on Prevention and Control against Pests in Actinidia Plants in Lushan Botanical Garden of China[J];Plant Diseases and Pests;2013年04期
3 ;Essential oil of Actinidia macrosperma, a catnip response kiwi endemic to China[J];Journal of Zhejiang University Science(Life Science);2006年09期
4 ;Fruit development rule of two Chinensis Actinidia cultivars ‘Fengyue’and ‘Cuiyu’[J];HuNan Agricultural Science & Technology Newsletter;2003年03期
5 刘青;贾东峰;黄春辉;钟敏;廖光联;徐小彪;;软枣猕猴桃(Actinidia arguta)种质资源研究进展[J];北方园艺;2020年22期
6 Fanglun JIN;Fawei ZHANG;Xuan YUE;Ming LI;Xuexi AO;;The Correlation between Different Fruiting Branch Diameters of Actinidia chinensis and Fruit Quality Change in Post-ripening Period[J];Asian Agricultural Research;2016年11期
7 ;Cell Ultrastructure of Kiwifruit (Actinidia chinensis) Shoot Tips During Cryopreservation[J];Agricultural Sciences in China;2006年08期
8 ;Ethanol extract from radix of Actinidia chinensis and Evodiamine regulated CCR7 expression in SW480 cells[J];中国现代医学杂志;2011年03期
9 张泽荣,刘培嵩;四川猕猴桃属一新种[J];植物研究;1984年02期
10 陈镇;李秀丽;陈志伟;乐有章;翟敬华;张鸿;戢小梅;;中国猕猴桃育种及品种选育研究[J];湖北农业科学;2019年S2期
11 蔡杰;杨立新;刘艳芳;;基于物联网的猕猴桃质量安全控制系统的设计与实现[J];湖北农业科学;2020年18期
12 张振万;杨淑性;;秦岭猕猴桃属(Actinidia Lindl.)植物的研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);1980年01期
13 何念杰,唐祥宁,朱福荣;赣中、北地区中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)病害调查与鉴定[J];江西农业大学学报;1989年01期
14 崔致学,黄学森,陈照峰,张迎喜,安景新,胡玉华;河南省猕猴桃资源调查[J];果树科学;1984年02期
15 王华进;彭世宏;储昭黔;;猕猴桃早期丰产栽培试验初报[J];安徽林业科技;1997年02期
16 Xiangsu LIU;Jiao AN;Ming Liu;Lihua JIN;Yilong PIAO;;Effect of Chitin Treatment on Softening of Actinidia arguta[J];Agricultural Biotechnology;2018年02期
17 阳小成;;Effects of mechanical vibration on root development of Actinidia chinensis plantlet[J];Journal of Chongqing University(English Edition);2007年04期
18 吕英民 ,陈俊愉;园艺植物栽培品种国际登录权威系列介绍(五) 国际登录权威简介[J];中国花卉园艺;2001年21期
19 HUANG Guohui;QU Yi;LI Tong;YUAN Hui;WANG Aide;TAN Dongmei;;Comparative Transcriptome Analysis of Actinidia arguta Fruits Reveals the Involvement of Various Transcription Factors in Ripening[J];Horticultural Plant Journal;2018年01期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 WANG Jiahui;SUN Haiyue;GUO Ruixue;WANG Fawei;WANG Ming;LI Yadong;;Development of EST-derived SSR markers in Actinidia arguta and genetic diversity analysis[A];2013全国植物生物学大会论文集[C];2013年
2 赵云鹏;邱英雄;龚唯;傅承新;;Authentication of Actinidia macrosperma using PCR-RFLP based on trnK sequences[A];浙江省第三届生物多样性保护与可持续发展研讨会会议论文摘要集[C];2006年
3 ;Four 12-En-28-urs-oic Acid Triterpenoids Isolated from Actinidia indochinensis Merr. var ovatifolia R.[A];中国化学会第四届有机化学学术会议论文集(上册)[C];2005年
4 GAO Shuaiping;HU Kangdi;HU Lanying;ZHANG Hua;;Hydrogensulfide prolongs shelf-life of fresh-cut kiwifruit by modulation of the antioxidant system[A];2013全国植物生物学大会论文集[C];2013年
5 杨龙龙;吴燕如;;猕猴桃传粉蜜蜂的初步研究[A];北京昆虫学会成立四十周年学术讨论会论文摘要汇编[C];1990年
6 Chao Ye;Hongxu Yang;Lin Luo;Wei Zhou;Gao Li;;The chemical constituents from the rhizomes of Actinidia kolomikta[A];中国化学会第十一届全国天然有机化学学术会议论文集(第四册)[C];2016年
7 张上隆;;水杨酸在猕猴桃成熟软化中的作用(英文)[A];张上隆果树学文选[C];2006年
8 白新鹏;裘爱泳;杨艳杰;;猕猴桃属植物国内外研究开发进展[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
9 齐永杰;徐义流;张金云;高正辉;秦改花;伊兴凯;;皖西大别山区野生猕猴桃种质资源[A];中国园艺学会2013年学术年会论文摘要集[C];2013年
10 周建平;杨足君;冯娟;唐宗祥;任正隆;;黑麦特异DNA重复序列的分离与鉴定[A];2005年全国作物遗传育种学术研讨会暨中国作物学会分子育种分会成立大会论文集(二)[C];2005年
11 Haitao Li;;Dynamic DNA 6mA regulation in base unpairing regions of mammalian genome[A];中国生物化学与分子生物学会2020全国学术在线会议摘要集[C];2020年
12 陈小凡;;DNA特性的研究[A];中国化学会·第十六届全国应用化学年会论文摘要集[C];2019年
13 宋世平;;基于DNA纳米传感界面和表观遗传学变化的癌症早期诊断[A];中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文摘要集[C];2019年
14 宋世平;;基于DNA纳米传感界面和表观遗传学变化的癌症早期诊断[A];中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文摘要集[C];2019年
15 逄寒;张宏;徐晓文;姜玮;;具有新型运行方式的DNA步行器构建及病毒片段检测应用[A];中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文摘要集[C];2019年
16 刘长林;李享;黄晓苹;宰晓涵;;铜锌超氧化物歧化酶新功能的发现及调控[A];中国化学会第六届全国生物物理化学会议(NCBPC-6)摘要集[C];2019年
17 Peipei Yin;Hui An;Linyu Zuo;Ye Hong;Jun Cheng;Hongye Fu;Chao Tang;Zhi Qi;;High concentrations of p53 assemble into biomolecular condensates with DNA[A];中国化学会第六届全国生物物理化学会议(NCBPC-6)摘要集[C];2019年
18 王振刚;;DNA/天然多糖自组装构筑仿酶材料及其协同催化行为研究[A];中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议论文(摘要)集(第三卷)[C];2019年
19 张子辰;王芳;张国栋;王秀凤;周亭;张志庆;;DNA纳米梯子用于抗癌药物的靶向输送[A];中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议论文(摘要)集(第三卷)[C];2019年
20 李迪;;利用DNA程序化的膜融合向活细胞内递送蛋白质的研究[A];中国化学会第十七届全国胶体与界面化学学术会议论文(摘要)集(第三卷)[C];2019年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 王路;利用DNA条形码与形态相结合的方法对亚历山大塔玛复合种和夜光藻的内共生绿藻进行系统分类学研究[D];厦门大学;2017年
2 郑心如;DNA双链断裂修复调控蛋白筛选及调控机制研究[D];厦门大学;2017年
3 李根;转录因子与DNA特异性识别机制的分子动力学模拟研究[D];华中农业大学;2019年
4 别丽华;bZIP转录因子与DNA相互作用中甲基化调控机制的分子模拟[D];华中农业大学;2018年
5 刘雨双;基于DNA链置换反应动力学和GFET对DNA甲基化的检测[D];内蒙古农业大学;2019年
6 刘轲;基于DNA纳米技术与原子力显微镜高分辨成像的精准基因检测研究与应用[D];上海交通大学;2018年
7 张保柱;DNA适体基荧光金属纳米簇对金属离子及生物分子的turn-on检测[D];山西大学;2019年
8 李锦;基于螺吡喃分子开关的G—四链体DNA荧光探针的构建与应用研究[D];西北大学;2019年
9 郭斌;基于DNA自组装纳米结构的生物传感新方法研究[D];重庆医科大学;2019年
10 周晓燕;基于功能性DNA纳米结构的等温扩增检测方法研究[D];重庆医科大学;2019年
11 李新;载多柔吡星DNA自组装纳米折纸对人卵巢癌靶向治疗的实验研究[D];武汉大学;2016年
12 刘升;酵母DNA损伤响应中ATR激酶及其相关复合物的结构研究[D];中国科学技术大学;2019年
13 Hafiz Muhammad Zakria;酵母呈递的肌生长抑素和白介素21基因DNA疫苗对小鼠体重和免疫系统的影响[D];西北农林科技大学;2018年
14 李翔;级联循环和酶催化下的DNA反应网络[D];中国科学技术大学;2019年
15 卢沙沙;DNA纳米技术在生物传感及智能水凝胶中的应用[D];中国科学技术大学;2019年
16 谢斯思;基于TALE组装的DNA支架增强外源多酶代谢通路[D];国防科技大学;2018年
17 韩晋峰;线粒体DNA通过TLR-9放大急性肺损伤液体失衡及炎症反应的机制研究[D];吉林大学;2019年
18 丁健生;基于母子细胞系及其酶消化的胎儿染色体非整倍体无创产前检测游离DNA参考物质的研究[D];北京协和医学院;2019年
19 管莎莎;肿瘤及外周血循环DNA检测在转移性胰腺癌中的临床应用价值[D];中国人民解放军医学院;2019年
20 王暾;应用于DNA分子电检测的碳纳米管和石墨烯薄膜谐振器件研究[D];厦门大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 赵洋;猕猴桃(Actinidia L.)荧光原位杂交技术体系的建立与优化[D];西南大学;2020年
2 陈卫娅;枇杷DNA纤维制备及Fiber-FISH技术体系的建立与应用[D];西南大学;2013年
3 李燕茹;线粒体DNA水平对脓毒症病情分层及预后评估的价值研究[D];重庆医科大学;2020年
4 汪改英;基于DNA和限制酶的逻辑计算模型的研究[D];厦门大学;2019年
5 闫晓珊;生物计算中病毒机模型和DNA逻辑电路的研究[D];厦门大学;2019年
6 刘雅思;广东省珍稀植物DNA条形码与分子鉴定[D];仲恺农业工程学院;2019年
7 高铭暄;变构核酸适体探针在DNA激酶—磷酸酶高灵敏检测中的应用[D];厦门大学;2019年
8 肖代琴;以DNA origami为模板的氧化铪纳米粒子的制备[D];厦门大学;2019年
9 王静文;酶辅助构建DNA纳米结构及其在无机纳米材料合成中的应用研究[D];厦门大学;2019年
10 周玉洁;基于DNA纳米机器和纳米材料的生物传感新方法[D];湖南大学;2019年
11 张亚;锌依赖的DNA结合蛋白家族基因OsPLATZ的功能研究[D];华南农业大学;2018年
12 张春连;芳杂环—铜(Ⅱ)-葡萄糖酸/氨基酸配合物的合成、性能及应用研究[D];华南农业大学;2018年
13 沈芳;三元混配铜(Ⅱ)配合物的DNA/HSA结合作用及细胞毒性研究[D];华南农业大学;2017年
14 刘媛媛;DNA水凝胶的制备及载药性能研究[D];福建中医药大学;2020年
15 王博;火炬松线粒体DNA全序列分析[D];华南农业大学;2018年
16 张友;H5亚型禽流感DNA疫苗及禽用免疫增强剂研制[D];华南农业大学;2018年
17 王刚;基于DNA条形码的新疆额尔齐斯河流域蚋科分类及系统发育研究(双翅目:长角亚目)[D];西北农林科技大学;2016年
18 张玉环;基于DNA比色逻辑门的食品中重金属离子和环境激素检测方法研究[D];西北农林科技大学;2016年
19 郑宇钒;法医DNA的快速分型研究[D];厦门大学;2019年
20 李燕茹;线粒体DNA水平对脓毒症病情分层及预后评估的价值研究[D];重庆医科大学;2020年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 黄辛;DNA骨架硫修饰研究又获新成果[N];科学时报;2011年
2 本报记者 辛明;邓亚军:灾难现场的DNA斗士[N];中国青年报;2011年
3 本报记者 欧阳晓红 韩宋辉;“可怕”的友邦DNA 267亿港元净利从何而来[N];经济观察报;2015年
4 闫洁;羊皮纸蕴藏古DNA[N];中国科学报;2015年
5 本报见习记者 赵广立;人类DNA仅8.2%有用?[N];中国科学报;2014年
6 张冬冬 译;最早不冻DNA测序破纪录[N];中国科学报;2013年
7 本报记者 马佳;未来存储新贵:DNA[N];中国科学报;2013年
8 实习记者 于紫月;寻找治癌“灵丹妙药” 染色体外环状DNA或是关键所在[N];科技日报;2020年
9 记者 张家伟;英研究称可基于DNA评估预期寿命[N];新华每日电讯;2019年
10 通讯员 王彤 顾镔彬 融媒体记者 李都;江北新区:“数据DNA计划”发布[N];南京日报;2020年
11 本报记者 陈曦;未来给你做手术的也许是DNA纳米机器人[N];科技日报;2020年
12 深圳特区报首席记者 孙锦;解读DNA惠及世界患癌儿童[N];深圳特区报;2018年
13 记者 冯卫东;DNA分子计算为可编程药丸铺路[N];科技日报;2018年
14 本报记者 李禾;DNA折纸术,“折”出生命所需神奇图案[N];科技日报;2019年
15 记者 刘霞;美日创建迄今最大DNA基因模型[N];科技日报;2019年
16 任芳言;古DNA揭示马的身世[N];中国科学报;2019年
17 记者 冯卫东;基因剪刀剪切DNA过程首次捕获[N];科技日报;2019年
18 中国科学院院士 华大基因理事长 杨焕明;听DNA说前世今生[N];中国科学报;2019年
19 编译 晋楠;DNA:警察手中的双刃剑[N];中国科学报;2018年
20 本报记者 马爱平;基因编辑应用前景好 但自行改变DNA不现实[N];科技日报;2019年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978