黄瓜（Cucumis sativus L.）老化种子基因组DNA的损伤及其修复的RAPD研究

【摘要】： 随着分子生物学的迅猛发展，RAPD(随机扩增多态性DNA)标记技术已广泛应用于生物学诸多领域。本文应用RAPD技术对人工老化和PEG处理的黄瓜种子进行扩增多态性DNA分析，建立了黄瓜种子基因组DNA的损伤及其修复的RAPD指纹图谱。 探讨了RAPD技术的最适条件。结果表明：模板DNA浓度为40-80ng／反应：Mg~(2+)浓度的范围在2.5-3.5mmol．L~(-1)；dNTPs浓度范围为100-200μmol．L~(-1)；Taq聚合酶浓度范围为1.0-2.0U；引物浓度为1.0-1.8μmol．L~(-1)。 在建立RAPD指纹图谱前进行了引物的筛选。结果发现：103条引物中有92条引物扩增出稳定而清楚的产物，占总引物的89.3％；另外，还研究了不同分子量、不同浓度、处理不同时间的PEG对黄瓜种子活力的影响，结果表明：用25％PEG6000溶液处理24小时的效果最佳。 筛选出应用于黄瓜老化种子基因组DNA的损伤及其修复的引物，并建立了老化和PEG处理的黄瓜种子的RAPD指纹图谱。在92条引物中有22条可应用于老化种子的研究，16条引物应用于PEG处理种子的研究，并从中找出了7条引物S190、S200、S300、S359、S475、S1140、S2144用来比较黄瓜老化种子及其渗调修复的RAPD扩增带型的变化。结果发现：人工老化处理的黄瓜种子的DNA带减少甚至消失，而PEG渗调后的黄瓜老化种子 黄瓜（Cu C；；ml．F SS打。；S L）老化种子基因组＊＊A的损伤及其修复的RA PD研究 DNA带重新出现或者与对照基本相同，从而建立了黄瓜老化种子基因组DNA的损伤与修复 的RAPD指纹图谱。 对两种处理的黄瓜种子进行电导率测定和萌发试验，发现种子活力与黄瓜老化种子基 因组DNA的损伤及其修复有密切关系。 RAPO技术能够用于黄瓜老化种子基因组DNA的损伤及其修复与种子活力的关系研究， 特别是在建立并优化其反应体系与反应程序后具有相当高的可靠性与准确性。