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碱性脂肪酶高产菌株Serratia sp. SL-11的筛选及酶的分离纯化与部分性质研究

李长春  
【摘要】:从重庆市北碚区附近汽修厂、火车站、油脂厂等地方采集163份土样、油样,筛选得到一株高产脂肪酶的野生细菌,命名为SL-11,根据菌体形态的显微观察和16SrDNA序列分析,经初步鉴定表明,该菌株为沙雷氏菌属(Serratia)。 对产酶发酵条件进行了优化,确定最佳培养基组成为:黄豆饼粉4.0%;蔗糖0.5%:橄榄油1.0%:K_2HPO_10.2%:NaH_2PO_40.1%:MgSO_4·7H_2O 0.1%:Tween8O 0.5%,pH 8.0。最佳摇瓶培养条件为:温度32℃,转速为200r/min,优化条件后产酶量可达到优化前的2-3倍,经5代培养,该菌株产酶能力稳定。 对其所产脂肪酶进行了分离纯化。菌体发酵液经过超滤浓缩、DEAE-Sepharose离子交换和Superdex200凝胶过滤等步骤处理,得到2个同工酶,命名为SLP-1、SLP-2。比活力分别为6690.15U/mg、5770.50U/mg;最终被纯化了40.67和35.08倍:回收率分别为20.9%、3.3%,经电泳检测均达到了电泳纯。 通过对两种同工酶的部分酶学性质的研究,发现其中SLP-1最适pH为9.0,最适温度为50℃,分子鼙约为319KD,亚基分子量为74.9KD;SLP-2最适pH为9.0,最适温度为47℃,分子量约为377KD,亚基分子量为77.6KD。测试了Mn~(2+)、Ga~(2+)、Co~(2+)、Fe~(2-)、Cu~(2+)、K~-、Mg~(2-)、Li等八种金属离子对酶的作用,发现这两种酶对金属离子均很敏感,Mn~(2+)、Ga~(2+)、Mg~(2+)对其酶活性具有强烈的激活作用,最高可使酶活提高14倍,仅Co~(2+)、Fe~(2+)对SLP-2活性具有一定的抑制作用。 由Serratia sp.SL-11产生的脂肪酶具有较高的温度耐受性利较高的pH适应范围,具有良好的开发前景。


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