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铜蓝蛋白的分离纯化及其性质与功能基团研究

褚波  
【摘要】:铜蓝蛋白(EC 1.16.3.1)是一种存在于脊椎动物血清中并携带了95%以上血清铜的α_2糖蛋白唾液酸酶,主要在肝脏中合成。该蛋白是一种应急反应蛋白,当生物体发生感染、炎症或损伤时,诱发了肝脏内铜蓝蛋白基因的大量表达使血清铜蓝蛋白浓度升高。铜蓝蛋白在血浆中的含量大概为300μg/mL,拥有多种生理功能,比如铜离子运输,血液凝固,血管生成,铁平衡,铁转运以及抗氧化作用等。目前经研究证明与铜蓝蛋白有关的疾病有老年痴呆、糖尿病、视网膜变性、锥体外系症状、Wilson症、心血管疾病、神经退化、动脉粥样硬化等疾病。研究铜蓝蛋白与这些疾病之间的关系已经是医学和生物学界的热点之一。 猪为哺乳纲,偶蹄目,猪科的动物,猪是人类重要的肉类来源,对人类的生活、经济作出了巨大的贡献。对猪血来源的铜蓝蛋白进行研究一方面可以弥补我国在铜蓝蛋白相关研究方面的空白,为研究铜蓝蛋白的生理功能研究提供一定的理论基础;另一方面,可以让广大农民朋友认识到猪血的价值,让猪血的利用价值得到更大程度的开发,提高其经济价值。此外,由于铜蓝蛋白参与了众多生理功能,因此它还是一种潜在的蛋白药物,也许可以提高动物的抗病能力,促进动物生长等。 本文主要对铜蓝蛋白的分离纯化、理化性质、酶促动力学性质、抑制剂以及功能基团进行了研究,结果如下: 1.铜蓝蛋白的分离纯化 以猪血清为原材料,经稀释、正丁醇脱脂、超滤、硫酸铵分级沉淀获得粗酶液,进一步经过DEAE-琼脂糖离子交换柱层析,羟基磷灰石层析,Superdex-200凝胶过滤纯化,以SDS-PAGE和等电聚焦电泳检测其纯度,获得了电泳纯的铜蓝蛋白,提纯倍数为216倍,比


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