卵母细胞成熟抑制剂对猪卵母细胞成熟的影响

【摘要】：与牛羊等动物的体外成熟卵母细胞相比，猪卵母细胞的体外成熟质量较差，这主要表现在卵母细胞的细胞质成熟差、多精子受精率高和胚胎发育能力低。近年来，许多学者在卵母细胞体外成熟液里添加抑制剂，以此来提高体外成熟卵母细胞的成熟质量。抑制剂对卵母细胞的核成熟率影响较小，但抑制剂能阻滞卵母细胞恢复减数分裂，使其停留在GⅤ期，这有利于使卵母细胞的细胞核成熟和细胞质成熟同步，另外，抑制剂能使卵母细胞的细胞核成熟时间集中，减少了老化卵母细胞的比例。本文以卵母细胞内生发泡染色质构型、极体出现比率、卵丘扩散程度和孤雌激活后卵裂率为主要检测统计指标，研究了抑制剂对卵母细胞成熟、卵丘扩散和发育能力的影响，以筛选出一种能够提高卵母细胞成熟质量的抑制剂。 试验1：卵丘细胞状态、卵巢保存温度和采集时间对卵母细胞内生发泡染色质构型的影响。本试验将不同卵丘细胞状态(完整或较差)的COCs，以及不同卵巢保存温度(25-30℃或31-34℃)和采集时间(8-9月份或11-12月份)的COCs处理后进行荧光染色，观察其卵母细胞内生发泡染色质构型。卵丘完整COCs组的GⅥ-GⅦ期卵母细胞比例极显著高于卵丘细胞较差的COCs组(74.46％vs 57.06％，P＜0.01)，但两组间GⅤ期卵母细胞的比例差异不显著(90.98％vs 85.44％，P＞0.05)；在31-34℃中高温保存的卵巢组，其GⅥ-GⅦ期和GⅤ期卵母细胞的比例极显著低于25-30℃低温保存组(45.96％vs 74.46％，P＜0.01；77.62％vs 90.98％，P＜0.01)；除GⅥ期卵母细胞比例受卵巢采集时间影响外，不同时间采集卵巢的卵母细胞在其它各减数分裂阶段的分布情况基本一致。结果表明：COCs内卵丘细胞完整程度、卵巢保存温度和卵巢采集时间影响了卵母细胞内生发泡染色质构型，将卵巢保存于25-30℃的环境中，并选取3层以上卵丘细胞的COCs进行成熟培养效果较好。 试验2：不同剂量3′，5′-cAMP抑制卵母细胞恢复减数分裂的效果。本试验将COCs随机分组培养于含有0、0.2、0.5、1和2mmol·L~(-1)3′，5′-cAMP的ⅣM培养液中，培养24h后染色，并同培养前(Oh)卵母细胞的染色情况相比较。随着3′，5′-cAMP剂量的增加，GⅥ-GⅦ期、GⅤ期卵母细胞比例均逐渐增加(24.06％、31.04％、42.71％、55.30％、60.71％；38.30％、55.88％、73.97％、83.71％、86.86％)；卵母细胞在含2mmol·L~(-1) 3′，5′-cAMP的ⅣM液中培养24h后，GⅥ-GⅦ期、GⅤ期卵母细胞比例均与Oh组卵母细胞差异不显著(60.71％ vs 74.79％，P＞0.05；