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2种金小蜂体内Wolbachia的wsp基因克隆与表达研究

王欢  
【摘要】:Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类细胞质遗传共生菌,最早于1924年在尖音库蚊Culex pipiens生殖组织内发现,并被命名为Wolbachia pipientis。Wolbachia参与了多种调控其宿主生殖活动的机制,包括诱导细胞质不亲和(cytoplasmic incompatibility,CI)、诱导孤雌生殖(parthenogenesis-induce,PI)、雄性致死(male killing)和雌性化(feminization),研究Wolbachia对于了解昆虫的生殖生物学、性别决定机制、物种进化及人工调控昆虫生殖行为等方面有重大意义。蝶蛹金小蜂是一种菜粉蝶和柑桔凤蝶蛹期的重要内寄生蜂,丽蝇蛹集金小蜂为蝇类蛹期的重要外寄生蜂,两种金小蜂有较近的亲缘关系,且均属蛹期特异性寄生蜂。两种寄生蜂分布广泛,自然寄生率高,颇具生防应用潜力。本论文以两种寄生蜂为研究对象,通过揭示这两种寄生蜂体内Wolbachia的侵染情况及Wolbachia wsp基因的差异,从而为深入研究Wolbachia与两种寄生蜂共生关系以及更好地发挥其在害虫生物防治中作用提供理论基础。 本论文采用Wolbachia的通用引物,A和B大组特异性引物对蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂体内Wolbachia的wsp基因进行PCR扩增及序列测定,并对测定的序列进行了同源性比较和系统发育分析。结果表明蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂均被A和B两个大组的Wolbachia复合感染;同种寄生蜂的雌蜂和雄蜂的wsp基因片段序列完全一致。采用通用引物从蝶蛹金小蜂中扩增出Wolbachia的wsp基因片段序列的长度为540 bp,属于B大组中Pip组,而从丽蝇蛹集金小蜂中扩增出Wolbachia的wsp基因片段序列的长度为558 bp,属于A大组中Uni组。用A-Wolbachia引物从蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集金小蜂中扩增出的wsp基因片段序列长度均为548 bp,同源性达99.8%;而用B-Wolbachia引物从两者中扩增的两条wsp基因片段序列长度各为424 bp和439 bp,同源性达87.5%。


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