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澳洲红千层属(Callistemon R.Br)植物的分子系统学探讨

李伟  
【摘要】:红千层属(Callistemon R.Br)植物为桃金娘科(Myrtaceae)常绿灌木或小乔木,原产于澳大利亚,是非常优美的观赏花木,以其独特的花姿、广泛的适应性,受到了城市绿化的青睐,具有广阔的市场前景和巨大的效益潜力。红千层(C.rigidus)引进我国已有百年历史,但并没有形成规模。目前,我国栽培的有以下几种:红千层(C.rigidus)、柳叶红千层(C·salignus)和垂枝红千层(C.viminalis)。同时关于红千层多样性分化的遗传背景方面的系统性研究报道较少,更多在于形态学描述。因此,在开展综合利用研究之前,对现有各份种质进行鉴定并弄清它们之间的亲缘关系及系统分类,具有十分重要的理论和现实意义。 本研究首次利用ISSR标记并结合形态学特征对15种红千层(Callistemon)植物进行了物种多样性的研究,结果如下: 通过对15种红千层(Callistemon)植物的生物学性状系统观察和测量数据,采用SAS6.2软件进行显著性检验,均达到了极显著水平。用表型性状标准差标准化的方法,用STAT软件,绘制了亲缘关系聚类图。当聚类系数是45.697时,供试红千层属植物种可分成两大类,第一大类包括有C.citrinus、C.comboynensis、C.formosus、C.injune pink、C.linearis、C.paludosus、C.polandii、红千层(C.rigidus)、柳叶红千层(C.salignus)、C.salignus rubra、C.teretifolius、C.violaceus,第二类有C.brachyandrus、C.pachyphyllus、垂枝红千层(C.viminalis)三种。 用改良CTAB法提取DNA效果良好,完全符合常规分子生物学实验的要求。正交试验优化筛选的ISSR-PCR反应体系为:在25μL反应体系中,含1×PCR buffer,2.5mmol.L~(-1)Mg~(2+),0.2mmol.L~(-1) dNTP,0.4μmol.L~(-1)引物,1.2ng.μL~(-1)模板DNA,0.5U Taq DNA聚合酶。据此结果,进行退火温度梯度试验和循环次数试验,得到反应程序为:94℃预变性3min:94℃变性30s,50℃退火1min,72℃延伸90s,循环45次。 利用优化的试验体系,对15个红千层(Callistemon)植物种和1个白千层(Melaleuca)植物种进行了ISSR分子鉴别利亲缘关系分析。结果表明:用19条引物共扩增出220个位点,其中多态性位点212个,多态位点百分率为96.4%。所有红千层(Callistemon)植物供试材料之


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