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巴马香猪皮肤离体后活力变化及影响因素

孙力华  
【摘要】: 早期迅速地封闭大面积创面是烧伤治疗的重要手段。以猪皮为首选的异种皮作为生物敷料用于烧伤创面覆盖已有接近半个世纪的历史,然而,对手术前如何保存有活性的猪皮至今尚没有统一的措施。在保存的过程中,由于猪离体皮肤缺乏血供和营养,细胞的生理代谢降低,逐渐衰老死亡,皮肤的活力也因此而逐渐下降。而此过程中其活力究竟呈何种趋势下降,目前还没有清晰的数据报道。 对于皮肤活力测定的指标较多,包括酶学、耗氧量及蛋白质、脂肪、核酸、葡萄糖代谢。其中基于琥珀酸脱氢酶(Succinic Dehydrogenase)反应的MTT法(Methylthiazalyl—tetra zalium,MTT)是现在普遍流行于各大皮库的活力测定法,尽管这种方法不是最快速、最简便的,但容易获得、重复性好,与移植成活率有线性关系,能准确反映出细胞与组织的整体活性。 本研究应用MTT法测定了在不同储存条件下巴马香猪皮肤的活力。其活力变化结果如下: 1.25℃室温下,新鲜猪皮在生理盐水中的活力持续下降,10小时后皮片活力降到53.15%,在其后的4小时一直维持在50%左右,16小时后活力突然降到25.98%并一直维持在此水平至24小时。而DMEM培养液(Dulbecco's ModifiedEagle's Medium,DMEM)中,最初4小时内皮片活力升高了9%,然后缓慢下降,到24小时还保持着58.53%的活力。该结果表明,在室温下使用DMEM培养液保存离体猪皮其效果要明显优于生理盐水。 2.4℃冰箱保存下,不论是生理盐水还是DMEM中,新鲜猪皮活力都随保存天数逐渐下降,第6天时活力都降为50%,15天后活力都降为20%左右。但整个下降趋势中,DMEM中保持的皮片活力略高于生理盐水中(P>0.05)。 3.液氮储存一个月后复温测得皮片活力降为77%,其后在25℃室温生理盐水中快速下降,6小时后则只有55.55%,在DMEM中,12小时后才降到52.61%,直到24小时后降为32.17%。而储存在4℃下,皮片在生理盐水中1天之后其活力就降到49.68%,在DMEM中直到第4天才降到低于50%。比较新鲜皮片的储存,液氮冻存后再常温保存的皮片活力下降较快,因此建议临床已决定手术时再复温液氮冻存皮,并尽快使用,以保证良好的移植效果。 我们用MTT法较全面准确地获得了以上不同温度及不同保存液下巴马香猪皮肤离体后的活力变化结果。据此总结出,如果要立即进行皮肤移植手术,则取皮后置于室温DMEM中,并且一天之内使用;如果短期几天内进行手术,为了既能节约又能保证有效的猪皮活力,直接将皮片浸泡于无菌生理盐水中置于4℃冰箱即可,但必须在一周之内使用;如果获得猪皮暂时不用,储存在液氮则是最佳措施。根据此结论有利于临床在手术前对皮片进行良好的保存,并且有望在许多基层医院建立猪的皮库,为治疗烧伤及时提供有活性的生物敷料。


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