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共振瑞利散射法用于酸性粘多糖的测定

郝秀利  
【摘要】: 近年来,多糖分子因具有广泛的生物学活性而备受关注。酸性粘多糖在食品、医药、化妆品等领域都有很大的应用价值,因此研究与检测酸性粘多糖具有重要的现实意义。共振瑞利散射(RRS)技术因灵敏度高、仪器简单等优点而引起了国内外研究者的极大兴趣和广泛关注,近十几年来该技术发展迅速,已成功应用于生物大分子和痕量金属、非金属以及有机物的测定。本论文以共振瑞利散射光谱技术为研究手段,对三种酸性粘多糖(透明质酸钠、肝素钠和硫酸葡聚糖钠)与结晶紫、二安替比林甲烷和金纳米的相互作用进行了研究,探讨了反应机理,提出了三波长叠加共振瑞利散射光谱法,并应用于样品分析。主要研究内容如下: 1.结晶紫与透明质酸钠相互作用的共振瑞利散射光谱及其应用研究 在pH为4.2的酸性介质中,透明质酸钠(SH)和结晶紫(CV)单独存在时RRS强度都很弱,但是当两者相互作用形成离子缔合物时,RRS强度显著增强,最大RRS峰波长位于715nm。我们研究了体系的RRS光谱特征、适宜的反应条件,建立了快速、准确测定SH的方法。方法的线性方程为△I=202.1+206.8C(μg/mL),线性范围是0.2~40μg/mL,检出限(3δ)为15ng/mL。该方法用于样品中透明质酸钠含量的测定,结果满意。 2.结晶紫三波长叠加共振瑞利散射法测定硫酸葡聚糖钠 研究了用结晶紫三波长叠加共振瑞利散射法(TWO-RRS)测定硫酸葡聚糖钠(DSS)的方法。在pH为10的BR缓冲溶液中,CV和DSS发生反应引起共振瑞利散射急剧增强,出现的三个强峰分别位于340,501和671 nm处。在最佳实验条件下,方法的线性范围是0.04~2.5μg/mL。在三个单峰处的检出限分别是24,27,和27 ng/mL,而三波长叠加后的检出限是13ng/mL。三波长叠加共振瑞利散射法与传统的单波长法相比具有更好的适应性及更高的灵敏度。 3.二安替比林甲烷共振瑞利散射法测定硫酸葡聚糖钠 在HAc-NaAc缓冲介质中,二安替比林甲烷(DAM)与硫酸葡聚糖钠(DSS)相互作用生成的结合产物聚集成较大的聚合体,引起共振瑞利散射强度急剧增大,同时出现新的散射峰。我们研究了体系的最佳反应条件及影响因素,建立了一种测定DSS的新方法。方法的检出限为17 ng/mL,线性范围是0.05-2.5μg/mL。 4.金纳米与硫酸葡聚糖钠相互作用的共振瑞利散射光谱研究 用一种新型金纳米(GNP)探针共振瑞利散射法测定了硫酸葡聚糖钠(DSS)。在HAc-NaAc缓冲介质中,GNP与DSS相互作用并引起共振瑞利散射强度急剧增大,同时出现新的散射峰位于332 nm处。研究了体系的反应条件及影响因素,在最佳实验条件下,散射强度在0.01~2.5μg/mL的范围内与DSS的浓度成正比,方法的检出限为1.85 ng/mL。 5.金纳米与肝素钠相互作用的共振瑞利散射光谱研究 提出了一种用金纳米(GNP)共振瑞利散射法测定肝素(Hep)的新方法,研究发现,在pH为4.7的HAc-NaAc缓冲溶液中,GNP和Hep通过静电和疏水作用迅速地结合成(GNP-Hep)聚合物,并引起体系的RRS强度急剧增大,基于这个现象,建立了一种快速灵敏的测定肝素的方法。该方法用于实际样品测定的结果令人满意。


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